Мир проекций — проекция как защитный механизм
Проекция – защитный механизм психики
В жизни довольно часто мы сталкиваемся с недопониманием в отношениях, неправильным истолкованием смысла слов или действий партнеров, приписыванием чужеродных мотивов – собственным и других людей. Иной раз подобные ошибки восприятия (наши собственные и других) принимают самые фантастические формы и размеры, приводя к неразрешимым недоразумениям, разрушая отношения и связи, мешая взаимопониманию.
Все это происходит потому, что мы живем в мире проекций. В психологии проекция – это приписывание другому человеку (или объекту) собственных качеств, чувств, намерений. Т.е. это ситуация, когда внутреннее мы воспринимаем как приходящее извне. Приписывается другим, как правило, то, что скрывается от самого себя, что невозможно в себе воспринимать, а также социально неприемлемое.
К примеру очень эгоцентричный человек, подавляющий собственные чувства и переживания, может говорить о других так: «Люди очень эгоистичны, им нет никакого дела до других, каждый беспокоится только о себе!».
Фрейд, описывая проективные механизмы, действующие в психике людей, говорил об этом, как о бессознательном процессе, при котором то, что мы отвергли в себе, возвращается к нам извне. При действии проективных механизмов психическое содержание всегда возвращается обратно, но возвращается оно в виде чего-то постороннего, «не нашего», чужого.
В самых грубых формах проекции это происходит буквально, когда человек слышит голоса, видит галлюцинации, т.е. человек слышит или видит то, чего нет в реальности. В этих ситуациях мы говорим о психотическом переживании – отчужденные и спроецированные вовне собственные психические переживания, мысли, чувственные восприятия возвращаются как посторонние голоса или видения. Человек избавляется от каких-то содержаний психики, но они возвращаются к нему как чужое, чуждое, а потому опасное и неведомое, приобретая фантастические образы и очертания.
В большинстве же случаев проекция не принимает столь грандиозного характера, настолько сильных искаженных форм, но тем не менее она, в своих грубых формах, может сильно искажать и преломлять наше понимание, смысл ситуации, особенности того или иного человека, контекст разговора и т.д.
Следует отметить, что Зигмунд Фрейд говорил о проекции как в нормальном, так и в патологическом функционировании. Мелани Кляйн описывает проекцию как базовый защитный механизм психики, который начинает функционировать очень рано, в эпохе младенчества. Первые проекции младенца – проекции собственной агрессии в образ матери.
Многие люди знают это понятие, термин «проекция», знакомы с ним хотя бы поверхностно, в общих чертах, но тем не менее не могут перестать проецировать собственные внутренние события на других людей. Почему так происходит? Скажу сразу, что нам и не нужно стремиться избавиться от проекций, мы не сможем этого сделать. Но смягчать наши проекции. Вопрос не в том, чтобы мы перестали проецировать, т.к. это невозможно, а в степени проекций, а также в том, что проецировать.
Проекции и иллюзии восприятия
Что влияет на наше восприятие реальности? Конечно же, многие факторы — внешние, так и внутренние. Но, имея дело с проективными механизмами, мы исследуем именно внутренние аспекты нашего восприятия мира. Именно этот пласт нас интересует сейчас.
На уровне тела аналог проекции – это выплевывание, сама возможность выплюнуть, т.е. попросту избавиться от чего-то неприятного, приносящего неудовольствие. И в психическом смысле мы можем также сказать, что проекция – это способ избавиться, сказать «нет» чему-то царапающему нас изнутри, что ощущается как неприемлемое, нежеланное, несвоевременное в данный момент.
Таким образом, проекция поднимает для нас проблему границ – границы между мной и другим, между мной и миром, что здесь принадлежит мне, а что другому – мое или не мое. Т.е. идея и связанная с ней проблематика своего и чужого, обнаружения границ или их стирания. С этим связаны также ситуации, когда человек не способен что-то принимать, с чем-то иметь дело, отсюда проблемы избегающего поведения. Подавляющее большинство иррациональных страхов людей связаны именно с механизмами проекции.
Например, человек, который боится ездить в метро. Подлинный источник опасности находится внутри него – это некое бессознательное угрожающее представление, от которого он избавляется с помощью проекции, помещая эту угрозу во внешний источник (в данном случае, метро) и привязывая свой страх к этому объекту.
Часто приписываются агрессивные чувства окружающим. Оно и понятно, ведь переживание агрессии в себе крайне болезненно, к тому же взрывоопасно. Или, напротив, отправляется вовне слабость, некомпетентность, неспособность понять, интеллектуальная недостаточность. В подобных ситуациях проекцию можно сравнить с поговоркой — в чужом глазу соринку замечу, а в своем бревна не замечаю.
Бывают проекции другого порядка. Например, проекция своего идеального Я – т.е. человек воспринимает другого как часть своего идеального Я. При этом происходит нарциссическое расширение собственного Я. Как правило, такая идеализация сменяется жестким разочарованием и связанным с этим обесцениванием прежде идеализируемого другого, тогда в него проецируются «плохие» части Я.
В самом широком смысле мы можем сказать, что проекция лежит в основе всех продуктов человеческой деятельности — культуры, мифологии, религии, искусства, политики, общественных образований.
Итак, как происходит восприятие? Мы прекрасно понимаем, что внутренний опыт не может сложиться без внешних факторов, но при этом важно понимание, что внутренний опыт никогда не равен воздействию внешних факторов, в этом смысле внутренний опыт обладает собственной автономией.
Что же происходит в момент встречи внешнего и внутреннего. Наше восприятие отнюдь не объективное, как некое зеркало, а оно зависит от огромного количества внутренних факторов – настроения, ожиданий, состояния, самочувствия. Но не только от таких, можно сказать, локальных аспектов, а в основе своей от генерализованного опыта всей нашей предшествующей жизни и связанными с этой генерализацией представлений, убеждений, в подавляющей основе бессознательных.
Сейчас ни для кого не секрет, что каждый из нас обусловлен в своем поведении некоторыми основными образами, чувствами, личными лейтмотивами, желаниями, которые мы строим в своей душе на ранних этапах жизненного опыта. Эта та сила в нас, которая стоит за троном Эго. И проекция вытаскивает наружу этот опыт, эту скрытую за троном Эго силу. В этом, собственно, смысл проекции и состоит. Не в том, чтобы увидеть это в других, а через обнаружение в другом, найти это в себе, т.е. вернуть себе собственную проекцию.
Ведь наше восприятие реальности – это не пассивный акт, не отражение внешней ситуации в том виде, в каком она как бы задана. В процессе восприятия принимают активное участие внутренние факторы, которыми мы обусловлены — особенности нашей истории, мышления, мировосприятия в целом. Это, скорее, активный акт, в котором участвует наше воображение, активизируемое нашей направленностью к чему-либо, желанием обнаружить нечто, или, наоборот, желанием чего-то избежать, не заметить, уклониться от встречи с неприятным. Можно сказать, что мы не просто воспринимаем реальность, а мы ее творим, создаем, конструируем.
Пока мы не знаем себя, мы проецируем неосознаваемые части себя, своей личности на других, в свою очередь, становясь экранами для их проекций. Мы проецируем в том числе наши давние ожидания, страхи, предубеждения, надежды и мечты. Такие проекции в самых драматичных своих проявлениях могут стать тюрьмой для нас самих и наших партнеров, способствуя ригидности, однообразию, застою в жизни и в отношениях, разочарованиям и разрывам.
Итак, мы понимаем, что окружающее, мир, другие люди не таковы, какими мы их воспринимаем, видим. Но при этом для нас крайне важно именно то, как мы видим все это. И проблема заключается в том, как истолковывать собственное восприятие.
Наш мир таков, каким мы его создаем — от иллюзий к пониманию себя и другого
Итак, мы понимаем, что наши убеждения лежат в основе того контекста жизни, который мы проживаем, и за любым выбором человека стоят глубоко укоренившиеся убеждения, которые в основе своей бессознательны.
И здесь мы обращаемся к сфере соотношения и взаимодействия реального и воображаемого. Проблема в том, чтобы учиться видеть реальность, распознавать ее, распознавать себя, отделять одно от другого. Но опять же, что значит увидеть реальность? Ведь мы не можем увидеть всю реальность, во всей ее полноте. В этом смысле объективность – недостижимый идеал, мы можем лишь приближаться к более точному пониманию происходящего.
Мы имеем дело не с утверждениями, а с предположениями. В психологии есть такое понятие, как священная рана. Священная рана (Джин Хьюстон) – это мощное, ранящее переживание, с которым человек не может справиться собственными силами. Часто это травматическое состояние проецируется психикой человека на внешнюю реальность (либо на собственное тело). Тогда внешняя реальность постоянно подвергается модификации этим негативным тяжелым переживанием человека. Но человек может этого не осознавать, ни сном, ни духом, что называется.
В связи с этим очень важно вспомнить свое прошлое, всю свою жизнь, исследовать и обнаружить ключевую драму своей жизни, как это преломляется в особенностях нашего восприятия мира, восприятия людей. Мы обнаруживаем этот образ священной раны и пытаемся связать его с проекциями, как этот образ проявлен в наших реальных отношениях с людьми, что мы проецируем в них.
Пытаясь наблюдать собственные восприятия, а также проекции с ними связанные, мы можем поднимать эти покровы, постепенно приближаясь к осознаванию более глубоких вещей в себе. Тогда с нами могут случиться перемены. Вообще, любая перемена начинается с того, что вы что-то начинаете по-другому воспринимать. М.Пруст как-то сказал: «Магия открытия заключается не в обнаружении новых ландшафтов, а в приобретении новых глаз».
Без проекций и дальнейшей идентификации с этими проекциями не происходит развитие нашего Я, нашей личности. Когда наша способность выходить за пределы собственных проекций и ожиданий укрепляется, мы можем видеть мир совсем иным, и также видеть другого человека в гораздо большей подлинности, в его естестве.
И проблема в связи с действием проективных механизмов заключается вовсе не в том, чтобы мы преодолели проекцию, научившись все «правильно», объективно воспринимать. В этом смысле нет объективности, объективность – некий абстрактный конструкт, недостижимый идеал. Наша жизнь пронизана диалектикой. Что мы можем сделать – это пытаться связывать противоречивые части нашего опыта, пытаясь примирять эти противоречия, исследуя возникающие в этом процессе взаимные перекрестные проекции — собственные и чужие.
Тогда мы сможем увидеть собственную красоту, а также красоту других людей, красоту окружающего мира.
Красота в глазах смотрящего
Есть такое известное выражение «Красота в глазах смотрящего». Исходя из этого понимания, та красота, которую мы видим в другом человеке, в мире – это отражение нашей собственной красоты.
Мир не меняется, жизнь не меняется, мир такой, какой он есть. Меняемся мы. Меняется наш взгляд на жизнь, на самих себя, на других людей. Когда мы видим и ощущаем собственную красоту, именно тогда мы начинаем замечать красоту вокруг себя. В этом контексте та красота, которую мы видим в мире – это наша собственная красота, которую мы через других людей, через другие объекты (созданные нами или кем-то другим) отражаем.
Психологическое благополучие в проекции цифровой социализации
Ababkov, V. A., Baryshnikova, K., Vorontsova-Venger, O. V. et al. (2016) Validizatsiya russkoyazychnoj versii oprosnika “Shkala vosprinimaemogo stressa-10” [Validation of the Russian version of the questionnaire “Scale of Perceived Stress-10”]. Vestnik Sankt-Peterburgskogo universiteta. Seriya 16. Psikhologiya. Pedagogika — Vestnik of St Petersburg University. Series 16. Psychology. Education, no. 2, pp. 6–15. DOI: 10.21638/11701/spbu16.2016.202 (In Russian)
Anglim, J., Horwood, S., Smillie, L. D. et al. (2020) Predicting psychological and subjective well-being from personality: А meta-analysis. Psychological Bulletin, vol. 146, no. 4, pp. 279–323. DOI: 10.1037/bul0000226 (In English)
Cohen, S., Williamson, G. M. (1988) Perceived stress in a probability sample of the United States. In: S. Spacapan, S. Oskamp (eds.). The social psychology of health: Claremont symposium on applied social psychology. Newbury Park, CA: Sage, pp. 31–67. (In English)
Deci, E. L., Ryan, R. M. (2008) Hedonia, eudaimonia, and well-being: An introduction. Journal of Happiness Studies, vol. 9, no. 1, pp. 1–11. DOI: 10.1007/s10902-006-9018-1 (In English)
Diener, E., Emmons, R. A., Larsen, R. J., Griffin, S. (1985) The satisfaction with life scale. Journal of Personality Assessment, vol. 49, no. 1, pp. 71–75. DOI: 10.1207/s15327752jpa4901_13 (In English)
Elshanskij, S. P., Anufriev, A. F., Kamaletdinova, Z. F. et al. (2015) Psikhometricheskie pokazateli russkoyazychnoj versii shkaly udovletvorennosti zhizn’yu [Psychometric indicators of the Russian version of the life satisfaction scale]. Russian Journal of Education and Psychology, no. 9, pp. 444–458. DOI: 10.12731/2218-7405-2015-9-33 (In Russian)
Harding, T., Lopez, V., Klainin-Yobas, P. (2019) Predictors of psychological well-being among higher education students. Psychology, vol. 10, no. 4, pp. 578–594. DOI: 10.4236/psych.2019.104037 (In English)
IBM SPSS Statistics 24 Algorithms (2016) IBM.com. [Online]. Available at: ftp://public.dhe.ibm.com/software/analytics/spss/documentation/statistics/24.0/en/client/Manuals/IBM_SPSS_Statistics_Algorithms.pdf (accessed 06.05.2020). (In English)
Len’kov, S. L., Rubtsova, N. E. (2017) Motivatsionnye determinanty dinamiki lichnostnykh chert Bol’shoj pyaterki za vremya obucheniya v vuze [Motivational determinants of the dynamics of personality traits of the Big Five during their studies at the university]. Izvestiya Rossijskogo gosudarstvennogo pedagogicheskogo universiteta imeni A. I. Gertsena — Izvestia: Herzen University Journal of Humanities & Sciences, no. 186, pp. 39–55. (In Russian)
Len’kov, S. L., Rubtsova, N. E. (2019) Cyber socialization of Russian youth: Risks of professional self-determination. In: W. Striełkowski, J. Cheng (eds.). Proceedings of the II International Scientific-Practical Conference “Psychology of Extreme Professions” (ISPCPEP 2019). S. l.: Atlantis Press, pp. 116–122. DOI: 10.2991/ispcpep-19.2019.28 (Advances in Social Science, Education and Humanities Research. Vol. 321). (In English)
Len’kov, S. L., Rubtsova, N. E., Efremova, G. I. (2019) Oprosnik vovlechennosti v kibersotsializatsiyu [The cyber socialization engagement questionnaire]. Yaroslavskij pedagogicheskij vestnik — Yaroslavl Pedagogical Bulletin, vol. 6, no. 111, pp. 109–119. (In Russian)
McDool, E., Powell, P., Roberts, J., Taylor, K. (2020) The internet and children’s psychological wellbeing. Journal of Health Economics, no. 69, article 102274. DOI: 10.1016/j.jhealeco.2019.102274 (In English)
Orben, A., Przybylski, A. K. (2019) Screens, teens, and psychological well-being: Evidence from three time-usediary studies. Psychological Science, vol. 30, no. 5, pp. 682–696. DOI: 10.1177/0956797619830329 (In English)
Ryff, C. D., Keyes, C. L. M. (1995) The structure of psychological well-being revisited. Journal of Personality and Social Psychology, vol. 69, no. 4, pp. 719–727. DOI: 10.1037/0022-3514.69.4.719 (In English)
Sohier, L., Van Ootegem, L., Verhofstadt, E. (2020) Well-being during the transition from work to retirement. Journal of Happiness Studies. DOI: 10.1007/s10902-020-00228-6 (In English)
Whillans, A. V., Chen, F. S. (2018) Facebook undermines the social belonging of first year students. Personality and Individual Differences, vol. 133, pp. 13–16. DOI: 10.1016/J.PAID.2017.03.043 (In English)
Zhukovskaya, L. V., Troshikhina, E. G. (2011) Shkala psikhologicheskogo blagopoluchiya K. Riff [The scale of psychological well-being K. Riff]. Psikhologicheskii zhurnal, vol. 32, no. 2, pp. 82–93. (In Russian)
Проекция Аитова—ArcGIS Pro | Документация
В этом разделе
Описание
Проекция Аитова – это модифицированная азимутальная проекция. Это компромиссная проекция, сетка которой принимает форму эллипса. Эта проекция подходит для небольших карт мира. Она была разработана русским картографом Давыдом Аитовым в 1889 г.
Проекция Аитова доступна в ArcGIS Pro 1.0, в ArcGIS Desktop 8.0 и более поздних их версиях.
Отображается картографическая проекция Аитова с центром в Гринвиче.Свойства проекции
В подразделах ниже описываются свойства проекции Аитова.
Градусная сетка
Меридианы расположены на одинаковом расстоянии друг от друга и вогнуты в направлении к центральному меридиану. Центральный меридиан является прямой линией и равен половине длины экватора. Параллели представляют собой кривые, расположенные на одинаковом расстоянии друг от друга и вогнутые в направлении к полюсам. Контур проекции образует форму эллипса. Полюса представлены в виде точек и являются вершинами эллипса (расположенными на малой оси). Градусная сетка проекции симметрична относительно экватора и центрального меридиана.
Искажения
Проекция Аитова не является ни равноугольной, ни равновеликой. Это значит, что в той или иной степени искажены все формы, площади, расстояния, направления и углы. Масштаб корректен вдоль экватора и центрального меридиана. Значения искажений симметричны относительно экватора и центрального меридиана.
Использование
Эта проекция подходит для мелкомасштабных карт, когда не требуется точное измерение площади.
Ограничения
Проекция Аитова поддерживается только на сфере. Для эллипсоида в качестве радиуса используется большая полуось.
Параметры
Параметры проекции Аитова следующие:
- Смещение по долготе
- Смещение по широте
- Центральный меридиан
Источники
Snyder, J. P. (1993). Flattening the Earth. Two Thousand Years of Map Projections. Chicago and London: University of Chicago Press.
Snyder, J. P. and Voxland, P. M. (1989). An Album of Map Projections. U.S. Geological Survey Professional Paper 1453. Washington, DC: United States Government Printing Office.
Отзыв по этому разделу?
Проекция Робинсона—ArcGIS Pro | Документация
Описание
Проекция Робинсона, возможно, самая часто используемая произвольная псевдоцилиндрическая проекция для карт мира. National Geographic использовал проекцию Робинсона для своих карт мира около десяти лет, до 1998.
Проекция была разработана Артуром Робинсоном в 1963 году по запросу компании Rand McNally, использующей больше графический дизайн, чем разработку математических уравнений. После представления, для краткости проекция называлась ортографическая («с правильным представлением»). Проекция доступна в ArcGIS Pro 1.0 и более поздних версиях, а также в ArcGIS Desktop 8.0 и позднее.
Проекция Робинсона, центрированная на Гринвичском меридиане.Свойства проекции
В подразделах ниже описываются свойства проекции Робинсона.
Градусная сетка
Проекция Робинсона — псевдоцилиндрическая. Меридианы представляют собой равномерно распределенные кривые, напоминающие эллиптические дуги. Он сходятся к центральному меридиану и пересекаются с параллелями под непрямыми углами. Параллели представляют собой прямые, расположенные через неравные промежутки. Экватор, оба полюса и центральный меридиан проецируются как прямые линии. Центральный меридиан равен 0.5072 длины проекции экватора, линии полюсов — 0.5322 длины экватора. Градусная сетка проекции симметрична относительно экватора и центрального меридиана.
Искажения
Проекция Робинсона не является ни равноугольной, ни равновеликой. Она в разной степени искажает формы, площади, расстояния, направления и углы. Искажения схожи с искажениями других произвольных псевдоцилиндрических проекций. Искажения площади возрастают с широтой и не меняются с долготой. Области высоких широт гипертрофированы. Угловые искажения умеренны у центра карты и увеличиваются к краям. Значения искажений симметричны относительно экватора и центрального меридиана.
Использование
Проекция Робинсона в основном применяется для карт мира. National Geographic использовал эту проекцию для своих карт мира около десяти лет, до 1998.
Варианты
Существует два доступных в ArcGIS варианта:
- Проекция Робинсона использует алгоритм вычисления, описанный J.P. Snyder. Проекция доступна в ArcGIS Pro 1.0 и более поздних версиях, а также в ArcGIS Desktop 8.0 и позднее.
- Robinson ArcInfo была добавлена позже, для применения на рабочих станциях ArcInfo. Она доступна в ArcGIS Pro 1.0 и в ArcGIS Desktop 9.0 и более поздних их версиях.
Ограничения
Оба варианта поддерживаются только на сфере. Для эллипсоида, в варианте проекции Робинсона применяется равновеликий радиус, а в Robinson ArcInfo — большая полуось.
Параметры
В проекции Робинсона имеются следующие параметры:
- Смещение по долготе
- Смещение по широте
- Центральный меридиан
В проекции Robinson ArcInfo имеются следующие параметры:
- Смещение по долготе
- Смещение по широте
- Центральный меридиан
Источники
Robinson, A. (1974). «A new map projection: its development and characteristics.» In: Kirschbaum, G. M. (eds.), Meine, K.-H. (eds.). International Yearbook of Cartography, Bonn-Bad Godesberg, Germany: Kirschbaum, 145-55.
Snyder, J. P. (1990). «The Robinson projection: A computation algorithm.» Cartography and Geographic Information Systems, 17 (4), p. 301-305.
Snyder, J. P. (1993). Flattening the Earth. Two Thousand Years of Map Projections. Chicago and London: University of Chicago Press.
Snyder, J. P. and Voxland, P. M. (1989). An Album of Map Projections. U.S. Geological Survey Professional Paper 1453. Washington, DC: United States Government Printing Office.
Отзыв по этому разделу?
Почему раздражают люди? Карл Юнг о тени и механизме проекции
Рубрики : Переводы, Последние статьи, Психология
Become a Patron!
Коротко разбираем, почему некоторые люди раздражают, что наше раздражение может рассказать о процессах, которые проходят внутри нас, что такое проекция, каким образом работает этот механизм психологической защиты и как всё это связано с архетипом «Тень», выделенным Карлом Густавом Юнгом.
У швейцарского психоаналитика Карла Густава Юнга и писателя Германа Гессе можно найти поразительно схожие мысли относительно того, почему некоторые люди раздражают нас так сильно. Вот пара показательных цитат:
Если вы ненавидите человека, вы ненавидите в нем что-то, что является частью вас самих. То, что не является нашей частью, не беспокоит нас.
Герман Гессе, «Демиан»
Все, что раздражает нас в других, может привести к пониманию нас самих.
Карл Юнг
Как отмечают Гессе и Юнг, если кто-то говорит или делает что-то, кажущееся эгоистичным или грубым, а мы в ответ испытываем злость или разочарование, значит, в этом опыте есть что-то, что может рассказать нам больше о нас самих.
Это не значит, что другие люди не ведут себя аморально или что наше суждение о таком поведении полностью безосновательно. Речь о том, что наша негативная эмоциональная реакция на воспринятые недостатки других людей отражает что-то, происходящее внутри нас.
Психологическая проекция — известный механизм самозащиты. Он вызывает проецирование наших собственных неуверенностей, изъянов и недостатков на других. Когда мы строго судим кого-то другого за то, что он груб, эгоистичен или глуп, в каком-то смысле мы делаем это для того, чтобы избежать противостояния этим характеристикам в нас самих.
В своей работе «Исследование феноменологии самости» Юнг говорит о «тени» — неизвестной, темной стороне личности.
Она темная, потому что является инстинктивной, иррациональной и примитивной, состоящей из таких импульсов, как похоть, власть, жадность, зависть, гнев и ярость. Но она также является скрытым источником творчества и интуиции. Осознание и интеграция теневого аспекта существенны для психологического здоровья — процесса, названного Юнгом индивидуацией.
Тень темна также потому, что она скрыта от света сознания. Согласно Юнгу, мы подавляем эти темные аспекты бессознательного, именно поэтому рано или поздно начинаем проецировать их на других. Он пишет:
Эти сопротивления обычно связаны с проекциями. Независимо от того, насколько очевидно может быть для независимого наблюдателя то, что это вопрос проекции, почти нет надежды, что субъект сам это осознает. Как известно, дело не в сознании субъекта, а в бессознательном, которое совершает проекцию. Следовательно, он встречается с проекциями, но не создает их. Результат проекции заключается в изоляции субъекта от его окружения, поскольку реальное отношение к нему заменяется иллюзорным. Проекция преобразует мир в копию собственного неизвестного лица субъекта.
Нередко прискорбно наблюдать, как вопиюще человек спутывает свою собственную жизнь и жизни других, оставаясь полностью неспособным увидеть, что вся эта трагедия происходит в нем самом и как он продолжает подкармливать ее и поддерживать.
Нет, не человек или его поведение беспокоит нас, а наша реакция на него. Но мы можем использовать эту реакцию как инструмент для рефлексии, чтобы выяснить, почему эта злоба и раздражение возникают.
На каком-то глубоком внутреннем уровне мы знаем, что все люди в сущности одинаковы. Это не «другой». Это «мы» или «наше», выраженные в различных телах с различными точками зрения. Священник Эдвард Бикерстет в «Трактате о молитве» так описывает один эпизод из жизни английского христианского реформатора Джона Брэдфорда:
Благочестивый мученик Брэдфорд, когда он увидел бедного заключенного, которого вели на казнь, воскликнул: «Туда, если бы не милость Божия, шел бы и Джон Брэдфорд». Он знал, что в его сердце есть те же греховные начала, которые привели преступника к этому позорному концу.
Цитата открыта для различных интерпретаций, но в свете этой дискуссии, можно сделать вывод, что Брэдфорд осознавал зло — теневой аспект — в себе, которое привело кого-то другого к совершению преступления и впоследствии к казни.
У каждого из нас есть тень, как и свобода принимать собственные решения. И каждый из нас способен совершать то, что будет его беспокоить. Но именно появление этого беспокойства заставляет нас противостоять теневому аспекту личности. При этом негативные эмоции, которые у нас возникают по поводу поведения других людей (раздражение, злость, ярость), можно использовать для внимательного изучения своей реакции, знакомства со своей тенью и в, конечном счете, со своей личностью во всей ее многогранности.
Читайте также
— Как возникают эмоции, о существовании которых мы не подозреваем
— Осознанность: почему не стоит избегать негативных эмоций?
— Интервью с Карлом Юнгом: «Единственная существующая опасность — это сам человек»
Обложка: Douglas Glass / Popperfoto / Getty Images
По материалам: «Carl Jung and Hermann Hesse Explain Why Other People Irritate Us» / Sam Woolfe
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.
Похожие статьи
Джеппар сравнила Россию с человеком, имеющим много «психологических проекций», наложенных на Украину и украинцев
Первый заместитель министра иностранных дел Украины Эмине Джеппар привела один из примеров «психологической проекции» России на граждан Украины — борьба с «терроризмом». 16 сентября осудили семерых крымских татар на большие сроки колонии строгого режима, их тоже обвиняют в организации и участии в «террористической» партии «Хизб ут-Тахрир».
Об этом сообщила 16 сентября первый заместитель на своей странице в Facebook.
Как отметила Джеппар, психологическая проекция — это когда внутреннее воспринимается ошибочно как такое, что происходит снаружи. Этот защитный механизм позволяет считать собственные недопустимые или неприемлемые чувства, желания, мотивы, идеи и т.д. чужими и, как следствие, не чувствовать за них ответственность.
«Именно это я наблюдаю с 2014 года. Как один из очень конкретных примеров — борьба с «терроризмом». Последние 6 лет Россия активно ищет и находит «террористов» среди граждан Украины в оккупированном Крыму.
Режим террора и запугивания, манипуляций и шантажа, что сегодня внедряется государственной системой РФ прикрывается поиском «террористов», «экстремистов», «шпионов», «диверсантов», «националистов» и т.п.», — подчеркнула она.
Как добавила Джеппар, Россия не только ативно избегает своей ответственности за все преступления, которые совершает по отношению к Украине в оккупированном Крыму, а пытается переложить на других, как с подачей воды.
По ее словам, особой мишенью репрессивной машины есть крымские татары. Несмотря на попытки на международных площадках показать «интернациональную дружбу», репрессии крымских татар «упаковываются» в «правосудие».
«То, что оккупационная власть называет «правосудием», фактически является формой давления и «зачисткой» нелояльных», — отметила заместитель.
Что известно- 16 сентября российский суд вынес приговор 8 фигурантам второй бахчисарайской группы «дела Хизб ут-Тахрир». Всех, кроме одного, осудили на большой срок заключения. Эрнеса Аметова признали невиновным и закрыли дело.
- Министерство иностранных дел Украины выразило решительный протест из-за неправомерного решения суда Российской Федерации о приговорах семи гражданам Украины, фигурантам второй бахчисарайской группы «Хизб ут-Тахрир».
- Как заявил народный депутат Украины от «Европейской солидарности» Ахтем Чийгоз, крымские татары никогда в истории не были террористами. По его словам, у крымских татар не было другого выхода, как показать, что есть вот такая борьба России в оккупированном Крыму против мусульман, и это сопротивление не завершится, несмотря на давление России.
- Как заявил народный депутат Украины «Голос» Рустем Умеров, оккупанты хотят сделать граждан Украины террористами. Зная, что в странах Европы и Запада эти дела воспринимаются очень негативно, Россия пытается сделать упор на терроризме.
Проекция, как защитный механизм личности, или почему мы видим в других себя
Контакт с окружающей нас реальностью происходит каждую минуту нашей жизни, мы сообщаем во вне какою-то информацию и принимаем. При построении отношений, да или просто коммуникации с другими людьми, мы сталкиваемся с тем, что вынуждены искать точки соприкосновения позиций, взглядов на вещи, чтобы выйти на понимание другого человека. Это бывает достаточно сложно. В идеале, сам человек осознает те паттерны, которые присутствуют у него во время коммуникации. Однако, часто бывает так, что мы сами того не понимая, встречаемся не только с другими, но и самими собой не теми, кем являемся фактически, а лишь искаженной проекцией себя самого.
О чем идет речь и что с этим делать? Для начала. Предлагаю разобраться в том, что вообще из себя представляет проекция, как психологический защитный механизм личности.
Эта статья адресована в первую очередь обычным людям, которые далеки от профессиональной психологии, но которым важно сохранить свое лицо, строить контакт с реальными людьми, а не со своим представлением о них.
Что такое проекция?
Под проекцией можно понимать механизм, когда психика воспринимает собственные качества, свойства, особенности, эмоции, как принадлежащие другим людям или процессам.
Проще говоря, мы часто видим то, что есть в нас самих в других, что вызывает определенные эмоции, чаще всего негативные. А замечаем мы это и акцентируемся на этих качествах именно потому, что это есть в нас самих. Мы это или в себе не принимаем, или это находится в режиме непроработанных психологических травм.
Психике легче вынести это «за скобки», не присваивать, ввиду того, что мы зачастую сами не принимаем какие-то качества собственной личности в себе.
Пример проекции из личного опыта
Приведу пример собственной проекции, которую периодически отслеживаю – нарушение психологических границ других людей. Это выглядит так, что я могу задать человеку, с которым близко общаюсь, неудобный вопрос, спросить о чем-то совсем личном, сообщить свое мнение, когда меня об этом не спрашивают. В итоге, когда я сталкиваюсь с подобными проявлениями у других людей, например, громкая речь или визг ребенка, или слишком близкий контакт в метро, то испытываю раздражение.
Это можно назвать «слепым пятном», когда для других это может быть вполне очевидно, а для самого человека нет, так как он включен в этот процесс и не может вынести объективную оценку происходящему.
Брать ответственность за своё поведение и реакции
Разумеется, когда сам человек понимает природу своих импульсов, то он в состоянии ими управлять, однако в большинстве случаев этого не происходит, человека «несет».
Брать ответственность за свои реакции и поведение – это зрелая позиция человека, который ответственен за самого себя и уважает окружающих его людей. Осознавание того, что фактически ты сам являешься источником всего того, что происходит вокруг (в случае с теми же границами) выводит на выстраивание своего поведения таким образом, что мы контактируем не с частями себя самого, а с другими людьми.
Мы строим общение сами с собой
Дело в том, что когда психика эти механизмы запускает, то человек не находится в реальном контакте с другим человеком, а строит общение сам с собой (со своим субъективным представлением о другом). И речь идет скорее не только о том, что человек об этом думает или знает, а об эмоциональной сфере личности, которая сложно поддается контролю, если не осознается.
В таком случае человек искренне может считать, что «его границы нарушены», хотя он сам «вторгся на чужую территорию», не понимая этого и обвиняя в этом другого человека.
Больше того, попытки «истребить» то, что не устраивает в других людях, в большинстве случаев ни к чему не приводят, так как направление приложение сил – это сам человек, и необходимо разобраться с этими качествами в себе самом.
В попытках научить другого человека не опаздывать, вы сами должны осознавать то, что опаздываете сами, либо вынуждены приходить вовремя, однако вас это не устраивает. И в этом случае ваши попытки «перевоспитать другого» будут направлены к себе самому. А в большинстве случаев, вы просто разряжаетесь, «спускаете пар», отчего вам становится легче, на этом все и заканчивается.
Причины кроются в нашем воспитании
Откуда растут ноги? Как правило, основой проекции является интроекция, когда нас воспитывали в таком ключе, что «Не забивай голову!», «Будь вежлив!», а вот хотим мы сами того или нет – не важно. Есть правила поведения в обществе, и, если мы их внутри себя не принимаем, то увидев поведение, которое не можем себе позволить, мы начинаем испытывать раздражение к человеку.
Когда мы предполагаем, как видит мир или ситуацию другой человек, особенно, если мы его не знаем, то при этом опираемся на личное представление об этом, осознанное или не осознанное. Поэтому в таких ситуациях лучше переспросить человека напрямую о чем-то, чем «додумывать» за него.
Как правило, мы критикуем других людей за те качества или поведение, носителями которых являемся мы сами. То есть мы не воспринимаем мир и окружающих непосредственно, сенсорно, а заменяем это восприятие на фантазию об этом.
Например, если мы видим скрытного человека, однако сами себе не позволяем быть такими в каких-то ситуациях, или наоборот, сами такие же, однако, не принимаем эту особенность в себе, то будем «накручивать» много причин такого поведения человека, оценивать его, злиться, однако не предполагаем, почему он в данный момент времени себя так ведет.
Это искажение реальности не дает возможности выйти с ней на прямой контакт. Мы строим отношения с самим собой, полагая, что общаемся с другим человеком. В таком случае любые претензии и обиды должны быть адресованы самому себе, а не другому человеку.
Желания «догнать и причинить добро»
В качестве индикаторов этого механизма можно привести несколько. Например.
Человек, вместо того, чтобы говорить: «Я», как правило, говорит: «Мы», или «Они». Нет присвоения самому себе своих слов. А на самом деле вы так думаете или полагаете, что так думаете?
Много критики всего и всех, желание научить других людей вести себя каким-то определенным образом. «Тебе обязательно нужно найти невесту и одну, сколько можно бегать туда – сюда?!». А если обратиться к потребностно-мотивационной сфере человека, который это навязывает другому, то не трудно понять, что поиск одного единственного – это его мечта и потребность. Это происходит автоматически. Человек, который это говорит другому, не отслеживает того, что сообщает о личной потребности, которая является исключительно его. А нужна ли эта самая невеста тому, кому дают подобную рекомендацию, совершенно не важно, ведь советчик искренне верит в то, что раз хочу я, значит и все другие тоже хотят, как не хотеть-то?!
Ну а если серьезно: когда сам человек научится четко понимать и осознавать, что ему нужно, тогда он будет уметь видеть потребности других людей, тогда не будет возникать желания «догнать и причинить добро». Когда мы присваиваем себе непринятые части себя, понимаем, что это мы сами, тогда с этим можно что-то делать.
Виды защитного механизма
Очень важно выводить это в режим осознания. Однако, если вам даже напрямую скажут о том, что у вас «это есть», то эмоции, которые в связи с этим у вас появятся, перекроют любые пути к контакту с тем, от чего вы так упорно стремитесь убежать.
В данном случае речь идет об агрессии, как способе защиты. Однако сам человек не понимает, что защищается от себя самого.
Психологи выделяют 3 вида этого психологического защитного механизма.
Зеркальная проекция – когда человек находит в другом или своем представлении о нем черты, характеристики, особенности, которые рассматривает, как свои, либо хотел бы иметь.
Например, искренне желая помочь, партнер в паре транслирует другому жизненную необходимость личной психологической терапии, говоря о том, что тот нуждается в ней и это ключ от всех тех дверей, перед которыми он стоит, не решаясь войти. Однако, если проанализировать потребности самого советчика, то вероятнее всего выяснится, что именно в психологических сессиях он находит для себя ресурс, на который может опираться в собственном движении вперед.
Проекция катарсиса – когда происходит то же самое, что я описал выше, однако, сам человек отказывается от этих черт, не признает их своими, не хочет их иметь.
Например, осуждение соседки по коммунальной квартире: сидя за чашкой кофе и обсуждая ситуацию, когда та самая соседка «лезет не в свои дела». Однако вот именно сейчас тетушка за «уплетанием» пирожного и распитием чашки кофе занимается ровно тем, что осуждает в другой. Разумеется, это вызывает сильные эмоции, что есть маркер того, что ситуация касается меня лично. Если бы никак не затрагивала, то эмоций бы не было, либо они не имели такую силу.
Дополнительная проекция – если человек приписывает какие-то черты, особенности или состояния другому человеку, которые оправдывают его собственное состояние или поведение.
Например, можно давать бесчисленное число советов относительно «правильного» поведения другого человека, однако мы помним поговорку, которая гласит о том, что «благими намерениями путь вымощен в ад». Или «Ну вот если бы не его поведение, то я была бы другой!» — говорит жена.
Очень важно осознавать личную грань ответственности, в первую очередь, за собственное поведение и реакции. Правда, не всегда это возможно в силу того, что не осознается и болезненно.
Фактически, любая проекция – это отвергаемая часть личности, которую следует присвоить.
Это возможно, если сам человек заинтересован в построении открытых и доверительных отношений, когда он чувствует себя безопасно и может открыться другим, познавая самого себя.
Если вы обнаружили признаки проекции у себя или у значимого для вас партнера, говорите об этом, обсуждайте, примеривайте к себе, давайте возможность присвоить другим то, что является их частью.
Не стоит давить на человека, упрекать в чем-то, если он пока не готов признавать какие-то особенности в себе. Он может быть просто не готов к тому, чтобы в полной мере осознавать ситуацию. Когда он увидит и почувствует, что вы не нападаете на него, а наоборот, стремитесь к контакту с ним, а не с его механизмами защиты, тогда этот контакт состоится. И вот именно в этот момент вы встретитесь!
Кто-то ждет такую встречу всю свою жизнь, живя рядом с другим человеком, а кто-то не знает о том, что такая встреча в принципе возможна!
Отдельно от символического порядка: M. D. Faber: 9780915042081: Amazon.com: Books
ЧТО ОЗНАЧАЕТ ОТКАЗ ОТ ПРИВЯЗКИ К СИМВОЛИЧЕСКОМУ ПОРЯДКУ?Следуя по пути, проложенному Фрейдом в книге «Цивилизация и ее недовольство» , М. Д. Фабер представляет глубокий анализ взаимоотношений между индивидуумом и обществом. Фабер утверждает, что «обычное сознание» служит защитной цели: даже когда мы изо всех сил пытаемся стать отдельными личностями, мы непрерывно проецируем объекты нашего внутреннего мира в окружающую среду.Наш обычный способ существования — это «переходное осознание», состояние восприятия, в котором мы стремимся поддерживать нашу связь с внутренним миром, открывая замещающие объекты в реальности нашего культурного царства. Символическая сфера — это магическая система поддержки, цель которой — защитить людей от опасности потери объекта.
Исследуя альтернативы обычному сознанию, Фабер обращается к буддизму, который предлагает практические методы ослабления нашей привязанности к объектам и освобождения нас от символического порядка.Предлагая пустоту ума как сущность ума, буддизм предлагает альтернативу западной привязанности (и прославления) к сфере культуры. Отдыхая в пространстве пустоты, человек освобождается от мучений внутренних объектов и гнетущей вселенной символов.
Книга Фабера представляет видение культуры как обширного переходного пространства. В нашем бегстве от разлуки и смерти мы проецируем существование на символические объекты, подавляя тревогу и освобождая себя от чувства незначительности и одиночества.Когда мы чувствуем, что объекты, с которыми мы отождествляем себя, усиливаются, они одновременно угнетают нас. Фабер задает вопрос: какой тип человека (и общества) может возникнуть, если люди больше не будут так отчаянно цепляться за символический порядок?
СОДЕРЖАНИЕ
Предисловие Ричарда А. Кенигсберга
Благодарности
Часть первая: переходная природа обычного сознания
Процесс преобразования тела и разума
Из колыбели
Интернализация мира
Зеркало
Темная сторона зеркала: расщепление
Агония дифференциации
Пески времени и вместилище пространства
Сам стимул
Опека
Связь с культурой
Эдип и после
Примечания и ссылки Часть первая
Часть вторая: Культурная сфера
Немного предыстории
Религиозно-экономическая сфера
Деньги и Magna Mater
Жертвенный путь к объекту
Священная Лукра
Психодинамические экстраполяции
Метафоры Маркса
Интерес в интересах
Порочные Круг и плохой родитель
Больше опиатов, больше тревог
Скрытая амбивалентность 9 0023 Товары и другие товары
Примечания и ссылки Часть вторая
Часть третья: Нарушение связи с внутренним миром
Взгляд назад, взгляд вперед
Значение необычных моментов
Возникновение необычного мира
Укрепление перемен
Преобразование прошлого на уровне разума и тела
Примечания и ссылки Часть третья
Теория проекции Фейербаха | H-Ideas
Дата: Вт, 5 марта 96 г., 15:39:11 EST
От: Майк Монако
Фейербах утверждал, что наши представления о «боге» всегда являются просто проекциями наших собственных ценностей. Бог удовлетворяет нашу потребность объективировать наши добродетели и воплощает наши ценности. Таким образом, сущность религии — это человеческая природа, и наши Боги говорят нам о нас самих … «теология как антропология». Я пытаюсь проследить историю этой идеи. Ницше работает с идеей в своем «Антихристе», особенно в разделах 16-17 и 25-26. Ницше утверждает, что, когда мы поклоняемся «богу», мы действительно поклоняемся нашим собственным добродетелям — «бог» олицетворяет наше восхищение собой, наше чувство власти.Я был бы очень признателен, если бы кто-нибудь мог указать мне в правильном направлении по этому поводу. Я слышал, что «физикализм» барона Гольбаха каким-то образом связан с этой идеей, но я не могу найти ничего его в переводе. Я также слышал, что у Ланге («История материализма») есть нечто подобное. Ланге читал Ницше, так что это могло быть хорошей подсказкой. Заранее благодарим за любую помощь, которую вы можете оказать.
Дата: среда, 6 марта 1996 г., 14:18:23 +0200 (IST) От: Роберт Дж. Гриффин
Рассмотрение теологии как антропологии может потребовать исследования идей дохристианских философов. извините за неясность источника, но книга, по которой я изучал греческий язык, включала различные высказывания и пословицы на полях, одна из которых гласила: «Если бы у лошадей были руки, они бы вылепили своих богов в форме лошадей». затем есть более поздняя латинская фраза: «Боги первыми сотворил страх». существовала также школа евгемеров, считавших, что мифы основаны на исторических событиях и персонажах.
еще раз, извините за мою ненаучную неясность, потому что я давно не имел дела с этим материалом. Я пишу только потому, что этого может быть достаточно, чтобы указать, что Фейербах возрождает классические представления. конечно, ничто не могло помешать гуманистам эпохи Возрождения передавать эти идеи, если предполагалось, что они применимы к языческим богам.
боб гриффин
тель-авивский университет
[email protected]
Дата: среда, 6 марта 1996 г., 15:07:06 -0800 (тихоокеанское стандартное время) От: Авраам Филип Сошер
> Роберт Дж. Гриффин
>
> Рассмотрение теологии как антропологии может потребовать исследования
> идей дохристианских философов. извините за неясность относительно источника
>, но книга, по которой я изучал греческий язык, включала различные высказывания
> и пословицы на полях, одна из которых гласила: «Если бы у лошадей были руки, они бы лепили своих богов в форме лошадей». . »
Это цитата (или пересказ) досократического Ксенофана.Для второй дискуссии, которая связывает это с Фейербахом (а также, я полагаю, Николаем Кузанским), см. Работу моего покойного учителя Амоса Функенштейна, особенно. его Богословие и научное воображение (Принстон, 1986). Он вернулся именно к этим вопросам за год до своей смерти на совместном семинаре с классиком из Беркли Тони Лонгом и в незаконченном MS. который в конечном итоге будет опубликован в той или иной форме.
Abe Socher
Департамент истории
Univ. Калифорния, Беркли
Socher @ uclink3.Berkeley.edu
Дата: Пт, 8 марта 1996 г. 07:36:53 -0500
От: [email protected]
Роберт Дж. Гриффин пишет: «Рассмотрение теологии как антропологии может помочь исследовать идеи. от дохристианских философов. […] «если бы у лошадей были руки, они бы лепили своих богов в форме лошадей». затем есть более поздняя латинская фраза: «Боги первыми создал страх». Была также школа Эухемера, который считал, что мифы основаны на исторических событиях и персонажах.[…] этого может быть достаточно, чтобы указать на то, что Фейербах возрождает классические представления … »
Лучшим источником евгемеристических предшественников Фейербаха является книга Франка Мануэля« Восемнадцатый век противостоит богам », Нью-Йорк: Атенеум, 1967. Это не только самая оригинальная книга моего старого учителя, но и очень много в ней, включая приписывание «страха, который первым создал богов» стихотворению «De Rerum Natura» исключительно раннего атеиста Лукреция. вторя еще более древней пиле эпикурейцев.Среди тех, кто цитирует или перефразирует Лукреция: Петроний Арбитр (Сатирикон), Статий (Фиваис 3), Бен Джонсон (Сеян II: 2), Ницше (Генеология морали), Джордж Сантаяна (Жизнь разума) и Джон Дьюи — все рассеяны. из замечательной левой коллекции Джорджа Селдеса, «Великие цитаты», Нью-Йорк: Лайл Стюарт, 1960, Pocket Books, 1967.
Но что касается богов в форме лошадей, я думаю, что они были созданы человеком … Houyhnhnms Свифта.
— Билл Эверделл, Бруклин
Дата: Вт, 5 марта 96 г., 16:44:00 PST
От: Серлинг, Ли
Я думаю, вам придется вернуться как минимум на пару тысяч лет назад. Овидий писал, что «удобно, чтобы были боги, и, как это удобно, будем верить, что они есть». И греки до него делали аналогичные наблюдения, хотя в настоящий момент я не могу вспомнить источники. (Я уверен, что и другие в этом списке могут их цитировать.) Даже еврейские пророки критиковали пророков, с которыми они не соглашались, говоря, по сути,: «Бог говорит, что ваши представления о Боге отражают только ваши собственные желания.»[Ср., Например, Иеремия 23.16 и далее]. Я думаю, что одним из первых шагов для любого критика религии почти в любой культуре было бы утверждение, что те, кто говорят от имени Бога или богов, являются» просто «(другой риторический ход) «проецирование собственных ценностей».
Lee Cerling
Pepperdine
Вернуться в меню
Подробная анатомия сосудов сетчатки человека с помощью проекционно-разрешенной оптической когерентной томографии Ангиография
Недавнее клиническое внедрение трехмерной технологии OCTA визуализация кровообращения сетчатки и хориоидеи, что было невозможно с 2-мерными изображениями FA.Внутри сетчатки в изображении FA преобладают SVP и хориоидальный сигнал с плохой визуализацией ICP и DCP 12,22,23 . OCTA en face изображений использовались для визуализации сосудистых сетей в сетчатке на разной глубине слой за слоем с использованием тонких пластин 15 . Используя этот подход, первоначально были выделены 2 различных сосудистых паттерна, которые Ламброзо и другие назвали поверхностным и глубоким сплетениями на основании их относительной глубины и сосудистых паттернов (рис. 1 и 4) 11,15 .Спаид и др. . далее отмечалось, что рядом с диском зрительного нерва может быть визуализирована радиально ориентированная сосудистая сеть, соответствующая радиальным перипапиллярным капиллярам, ранее известным из гистологии, но плохо визуализированной FA 11 . Эти наблюдения привели ко многим ранним исследованиям OCTA как на нормальных, так и на пораженных глазах 24 , однако эти анализы были значительно ограничены из-за артефакта проекции потока 16,23 , который предотвращал: (1) способность отделить ВЧД от DCP, (2) точная визуализация аномальной неоваскуляризации в бессосудистых областях сетчатки (как при дегенерации желтого пятна), (3) точная количественная оценка отсутствия перфузии в нормально васкуляризованных областях сетчатки (как при диабете) и (4) визуализация промежутки между сплетениями.Действительно, при обычном ОКТА все слои сетчатки, включая бессосудистую внешнюю сетчатку, по-видимому, содержат сигнал потока, и между сосудистыми сплетениями невозможно определить естественную границу. Кроме того, из-за артефакта проекции потока, истинные границы сплетения между поверхностной и более глубокой сосудистой сетью не могли быть хорошо охарактеризованы, что привело к сегментации на границе INL / IPL на SD-OCT (как показано на рисунках 1 и 4). К сожалению, эта анатомическая граница приводит к непредсказуемой сегментации ВЧД между поверхностной и глубокой пластинами.
Алгоритм PR-OCTA обеспечивает новый и более точный способ детального исследования анатомии сосудов сетчатки у людей in vivo 18 . В этой статье мы использовали эту новую технологию для улучшения визуализации сосудов сетчатки несколькими важными способами. Во-первых, мы демонстрируем, что PR-OCTA может визуализировать четыре уникальных сосудистых сплетения в сетчатке человека с различными сосудистыми паттернами, которые различаются в зависимости от глубины и расположения от нерва. Во-вторых, с помощью PR-OCTA можно визуализировать промежутки между сплетениями и соединяющие их сегменты сосудов in vivo .В-третьих, PR-OCTA сохраняет сигнал потока in situ в более глубоких сосудах, что позволяет визуализировать непрерывные капиллярные сети в ICP и DCP. Это было невозможно с более ранними попытками подавления проецирования с использованием алгоритмов вычитания слэба, которые приводили к многочисленным пробелам, нарушающим непрерывность более глубоких слоев сосудистой сети 16,21,25 . Наконец, мы смогли выполнить количественный анализ плотности капилляров с помощью PR-OCTA и установить относительные и абсолютные минимумы плотности сосудов, которые образуют естественные границы между сосудистыми сплетениями сетчатки.Эти границы были определены с точки зрения анатомических слоев сетчатки, которые можно было легко сегментировать по структурным изображениям ОКТ. Основываясь на том, что можно описать с помощью PR-OCTA, мы предлагаем систему терминологии для кровообращения в сетчатке (рис. 1, 4 и 5), которая, как мы надеемся, будет полезна для будущих клинических исследований. Эти определения согласуются с подробной анатомией, известной из гистологических исследований 2,4,12 , но более подробны, чем то, что использовалось в предыдущей литературе OCTA. Эта анатомическая схема сосудов PR-OCTA описана ниже.
Поверхностный сосудистый комплекс состоит из SVP и RPCP. СВП представляет собой сеть как крупных, так и мелких сосудов, напрямую связанных с артериями и венами сетчатки, и снабжает все другие сосудистые сплетения. В макуле SVP расположен по центростремительной схеме, которая сходится к парафовеальному капиллярному кольцу (рис. 5). На периферии верхнее и нижнее кровообращение сходятся в виде чередующихся гребешков, аналогичных сосудистой сети сетчатки, показанной FA 12,23 .Гистология приматов показала, что SVP снабжает все другие сосудистые сплетения через вертикальные прекапиллярные артериальные сегменты, которые обычно восходят к NFL (в случае RPCP) и спускаются в более глубокие слои (ICP и DCP) от 190–126-го отрезка. порядка ответвлений от главных аркад и конечных продолжений артериальных сегментов СВП 2,4 . Посткапиллярные сегменты часто стекают непосредственно в главные венозные дуги 3 . Теперь мы можем визуализировать эти сосудистые сети с помощью PR-OCTA, включая соединительные сосуды и ламинарные сети в ICP и DCP (рис.6). Плотность сосудов СВП уменьшается в зависимости от расстояния от зрительного нерва (рис. 7) по мере уменьшения толщины окружающей GCL (рис. 2). Эти результаты хорошо коррелируют с тем, что известно из гистологии приматов 2 .
RPCP представляет собой уникальное капиллярное сплетение в перипапиллярной области с тремя определяющими характеристиками из исходной гистологии, которые могут быть однозначно визуализированы в SVC путем сегментации на интерфейсе NFL / GCL 4,5 . Во-первых, в отличие от более глубокого капиллярного сплетения SVP, RPC проходят относительно более длинные и прямые пути, чем другие сплетения (рис.5) 4 . Во-вторых, у них меньше анастомозов в плоскости RPCP (рис. 5), но они питаются прекапиллярными артериальными сегментами от SVP и дренируются посткапиллярными венозными сегментами в SVP. В-третьих, хотя в этих данных мы сосредоточили анализ на макулопапиллярной оси, гистология показывает, что эти сосуды расположены только в заднем полюсе, где они проходят рядом с плотными аксонами NFL в асимметричном распределении бабочки вокруг зрительного нерва и сосудистых аркад 4 .Предыдущие исследования показали, что этот слой питает NFL и, следовательно, является наиболее плотным в перипапиллярной области и уменьшается по толщине по мере уменьшения NFL, что согласуется с нашими выводами (Рис. 5 и 7) 2,4,5 .
В целом ВПВ представляет собой чрезвычайно плотную сосудистую сеть в перипапиллярной области (рис. 5), плотность которой уменьшается по мере удаления от диска вдоль макулопапиллярной оси (рис. 7). Это согласуется с предыдущими гистологическими данными — Snodderly et al .сообщили о процентном соотношении площади сетчатки, покрытой капиллярами, и обнаружили, что он был самым высоким в перипапиллярной области, часто превышая 60% 2 .
DVC состоит из ICP выше INL и DCP ниже INL. Капилляры ICP и DCP имеют дольчатую конфигурацию без предпочтения направления в их ламинарных плоскостях. Они состоят из капилляров одинакового размера (рис. 5), за исключением более крупных сосудов, которые соединяют сплетения (рис. 6). Из гистологии приматов мы знаем, что эти сплетения представляют собой терминальные анастомотические капиллярные сети, снабжаемые вертикально ориентированными соединительными артериями и венами из SVP 3 , что мы теперь можем продемонстрировать (рис.6). Конфокальная микроскопия на ex vivo образцах показала, что ICP располагается среди отростков биполярных клеток, а DCP локализуется в области около горизонтальных клеток во внешнем INL 26 , предположительно из-за местных метаболических потребностей в сетчатке 3 . Кроме того, мы продемонстрировали, что эти сплетения имеют относительно постоянную плотность капилляров от зрительного нерва к периферии вдоль макулопапиллярной оси (рис. 7) и сливаются примерно на 6-7 мм в височной области от ямки, два новых открытия, которым способствует более широкое поле зрения OCTA по сравнению с предшествующими технологиями 9,10 и улучшенной визуализацией потока на месте с использованием PR-OCTA.
Мы разработали систему для сегментирования кровообращения сетчатки на 2 комплекса и 4 сплетения с использованием анатомических слоев, которые могут быть очерчены на структурной ОКТ (рис. 5). Подходящая схема сегментации, которая будет использоваться для отображения и количественного анализа en face PR-OCTA, зависит от анатомической области. В периферической сетчатке SVC и DVC — это 2 различимых слоя. В макуле DVC можно разделить на ICP и DCP для дальнейшего улучшения выявления выпадения капилляров и других сосудистых патологий.В перипапиллярной области SVC можно разделить на RPCP и SVP. Вокруг фовеальной аваскулярной зоны (FAZ) сплетения сетчатки сходятся, образуя единую парафовеальную капиллярную петлю и вместе определяют границы FAZ. Это четко визуализируется на PR-OCTA (рис. 4) в соответствии с ранними гистологическими исследованиями на приматах 2,12 , что предполагает, что ранние отчеты, подчеркивающие различия в площади FAZ между поверхностными и глубокими сплетениями, могут не иметь смысла. Поэтому мы рекомендуем измерять размер FAZ с использованием проекции en face , которая включает все сплетения сетчатки, а не разделять область FAZ на поверхностные и глубокие области FAZ, как это было сделано в ранних анализах OCTA 23 .
У этого анализа есть ряд ограничений. Во-первых, мы сообщаем значения только для небольшой группы испытуемых. Дальнейшие исследования с использованием PR-OCTA необходимы для создания нормативной базы данных о сетчатке сплетения, которая учитывает соответствующие демографические переменные, такие как возраст, пол, раса / этническая принадлежность и ошибка рефракции / осевая длина глаза, в дополнение к биологическим переменным, таким как сатурация кислорода, употребление кофеина и физическая активность. Во-вторых, анализ PR-OCTA на пораженных глазах выходит за рамки данного отчета.При некоторых заболеваниях анатомические границы сетчатки трудно идентифицировать и предотвратить детальный анализ отдельных сплетений.
Сосудистые комплексы и сплетения сетчатки, которые мы идентифицировали и измерили с помощью PR-OCTA, находят применение при заболеваниях сетчатки и зрительного нерва. При глаукоме 27,28,29,30 и других нейродегенеративных заболеваниях 24 структурная ОКТ перипапиллярной NFL и GCC желтого пятна была полезна в диагностике и мониторинге. Атрофия и истончение этих структур являются объективными и точно поддающимися количественной оценке индикаторами заболевания.Однако отек сетчатки может затруднить измерения толщины, а при запущенной глаукоме в этих структурах преобладает остаточная глиальная ткань и они больше не служат надежными индикаторами заболевания 31 . Оптическая когерентная томография, ангиография сосудов, снабжающих эти структуры, является многообещающим альтернативным подходом к диагностике и мониторингу этих заболеваний 6,32,33,34,35 . Используя PR-OCTA, мы четко идентифицировали расположение RPCP в перипапиллярной области и SVC в макуле.Точное измерение перфузии сосудов в этих сплетениях может улучшить оценку глаукомы и других заболеваний зрительного нерва.
Использование PR-OCTA для разделения кровообращения сетчатки на SVC, ICP и DCP в макуле и SVC и DVC на периферии может быть полезно при оценке выпадения капилляров, микроаневризм, расширенных шунтирующих сосудов и других сосудов. патологии, связанные с диабетической ретинопатией 20,27 и другими ишемическими заболеваниями сетчатки. Существуют также заболевания сетчатки, которые, как предполагается, поражают отдельные сплетения, такие как парацентральная острая средняя макулопатия 28 , и OCTA продемонстрировала локализованную неперфузию при этом заболевании даже в присутствии нормальной FA 29,30 .Использование PR-OCTA для визуализации выпадения капилляров в ВЧД и ДКП, а также аномальных сосудов во всех слоях сетчатки может быть полезным при оценке этих заболеваний. Поскольку FA изменил наше понимание патофизиологии сетчатки, OCTA может привести к еще более глубокому пониманию и, в конечном итоге, обеспечить более раннюю и более конкретную идентификацию заболевания и лучшие результаты для пациентов. Демонстрируя анатомическую организацию сосудистых сплетений сетчатки в нормальных глазах человека, эта работа с использованием PR-OCTA обеспечивает рациональную схему номенклатуры и сегментации сосудистой сети сетчатки в будущих публикациях OCTA.
За волшебством — рейв [PUBS]
Сара Абронс недавно поделилась видео о проецировании человека, сделанном художником Омоте Нобумичи Асаи. Это потрясающая демонстрация того, что можно сделать сегодня в AV, если вы можете объединить свои творческие навыки с доступными технологиями.
Неоднократно спрашивали, не разрушает ли AV-индустрия «волшебство» такого рода впечатлений, будь то наблюдение за ними удаленно или на мероприятиях в прямом эфире. Я скажу за себя, что это не так, потому что я всегда рад видеть, как создается опыт, а затем могу оценить всю закулисную работу, необходимую для реализации чего-то подобного.
Таким образом, я подумал, что пролил свет на проекционное отображение человека (каламбур) для тех, кто может не знать, что здесь происходит за кулисами. Я воспользуюсь видео, которым поделилась Сара, в качестве справочника.
1) Постройте модель.
Свет изгибается при попадании на разные поверхности. Если вы спроецируете прямую линию на изогнутую поверхность, она будет выглядеть изогнутой. Если вы хотите, чтобы линия по-прежнему выглядела «прямой», вам на самом деле нужно отрегулировать линию, изогнув ее в противоположном направлении, прежде чем проецировать ее.Теперь, когда эта кривая линия проецируется на криволинейную поверхность, линия выглядит прямой.
Для этого вам необходимо знать все поверхности, на которые вы будете проецировать, и построить 3D-модель. Со зданиями или другими изготовленными или построенными объектами могут существовать существующие 3D-модели, с которыми можно работать. В случае картирования проекции человека этот трехмерный план содержится только в ДНК, поэтому извлечь его в лучшем случае будет сложно! Здесь на помощь приходит 3D-сканирование. 3D-сканер можно использовать для картирования лица и создания цифрового воссоздания с помощью 3D-модели.Это очень похоже на старый аналоговый способ сделать это: положить чье-то лицо в гипс и создать форму, а затем использовать ее для создания бюста. Голливуд делал это годами, создавая маски для лица актера или актрисы.
В случае с видео они создали 3D-версию головы модели с помощью 3D-сканера, а затем использовали эту модель для создания проецируемого контента.
Видео заставляет вас думать, что оно сканирует ее голову в реальном времени, а затем начинает проецировать, но это не так.Эффект сканирования зеленой строки является частью процесса, но делается это заранее. Эффект сканирования в видео — это просто больше «искусство».
3D-сканирование видео — это часть процесса, просто оно происходит намного раньше, а не в реальном времени.
2) Создание контента
Теперь, когда модель создана, художник может начать создавать контент, который он или она хочет спроецировать. На рынке есть несколько программных решений для 3D-моделирования, которые можно использовать. Это очень похоже на создание набора видео или скинов и текстур, которые впоследствии можно запускать или воспроизводить поверх созданной 3D-модели.Именно здесь навыки творчества и создания контента, безусловно, являются ключевыми.
3) Отслеживание объектов
Теперь, если бы вы выполняли проекцию на статический объект, ваша работа была бы почти завершена. Однако в этом случае объект — это человек, и человек движется. Как адаптировать изображение к движению актера или актрисы в реальном времени?
Если вы когда-либо играли с 3D-моделью на своем компьютере, вы можете манипулировать моделью, поворачивать ее из стороны в сторону и т. Д. С помощью мыши.Довольно просто. В случае отображения проекции человека вы хотите иметь возможность превращать лицо модели в мышь. Как ты это делаешь? Родинки.
На снимке камеры «вне оси» показаны лица моделей с множеством «отметин красоты».
На снимке выше показано лицо актрисы под углом, и, похоже, у нее есть несколько отметин красоты. Однако это просто хороший макияж. Если вы посмотрите на снимки, сделанные спереди, вы заметите, что эти родинки белые. Это не точки, проецируемые на модель.Скорее, это точки, отражающие свет обратно. Эти «родинки», скорее всего, покрыты отражающим материалом, который освещается источником инфракрасного света, а затем отражается обратно в инфракрасную камеру, которая отслеживает движение этих точек.
При освещении «кроты» становятся ориентирами для отслеживания.
Впервые я увидел эту технологию в детстве на вертолете Apache, где пушка движется, когда наводчик поворачивает голову, чтобы посмотреть на цель. На спине у шлема наводчика были фонари, которые отслеживались датчиками на подголовнике его сиденья.Для большинства из нас Nintendo Wii является очень знакомым примером того же самого: контроллер Wii имеет внутри ИК-камеру, а на панели Wii есть два ИК-индикатора, которые отслеживает контроллер.
Вы заметите, что на видео есть точки по краям лица актрисы, чтобы определить общий размер и внешние границы холста, а затем есть внутренние точки, расположенные симметрично на лице, причем центр является концом нос. Все они создают ориентиры для программного обеспечения, а программное обеспечение ИК-камеры переводит их в инструкции по управлению 3D-моделью, проецируемой на лицо.
Изображение проецируется на лицо в зависимости от ориентации отражающих точек.
Когда ориентация точек изменяется в реальном времени, программное обеспечение ИК-камеры сообщает программе 3D-моделирования для управления 3D-моделью.
4) пр.
Учитывая все вышесказанное, последний шаг — спроецировать изображение на лицо. Это можно сделать с помощью одного или нескольких проекторов, в зависимости от того, какую часть поверхности вы хотите освещать, и от желаемых углов обзора контента.
В данном случае это, скорее всего, одиночный проектор с лампочкой средней мощности (3000-5000 люмен), исходя из того, что размер холста небольшой, а желаемый угол довольно ограничен для снимков камерой.
И все! 4 шага, которые легко объяснить, но очень сложно реализовать без правильного набора навыков и оборудования. Вы можете понять, почему для всего этого необходима отличная команда или партнерские отношения.
Надеюсь, мне было интересно изучить закулисную жизнь отличного видео и публикации.Спасибо за вдохновение Сара
Проекция MAP2 человека P1 PROT-r-MAP2A / B-P1 — EnCor Biotechnology
На полосе S показаны стандарты молекулярной массы указанных кажущихся молекулярных масс в килодальтонах. Следующие 5 дорожек показывают 2 мкг очищенных рекомбинантных форм различных белков MAP2 человека. D — рекомбинантный полноразмерный MAP2D, а C — полноразмерный рекомбинантный MAP2C. MAP2D состоит из 559 аминокислот, в то время как MAP2C составляет 471, без одного из связывающих микротрубочки доменов MAP2D и более N-концевой N-концевой последовательности из 57 аминокислот.Дорожки P1, P2 и P3 показывают каждый рекомбинантный сегмент проекционного домена MAP2 человека, обнаруженный в MAP2A и B, но отсутствующий в MAP2C и D. Конструкция P1 представляет собой аминокислоты 233-684, P2 составляет 712-1136 и P3 составляет 1137- 1588. Все конструкции работают на SDS-PAGE медленнее, чем ожидалось, исходя из их молекулярного размера, вероятно, из-за высокого содержания в них заряженных аминокислот. Дорожка, обозначенная BSA, содержит 2 мкг загрузочного стандарта бычьего сывороточного альбумина.
Связанный с микротрубочками белок 2 или MAP2 является основным связывающим микротрубочки белком нейронов, где он сконцентрирован в дендритах и перикариях, но отсутствует в аксонах (1).Существует единственный ген MAP2 млекопитающих, который может генерировать несколько форм с более низкой молекулярной массой, обычно называемых MAP2C и MAP2D, которые работают на гелях SDS-PAGE при 60-70 кДа, хотя на самом деле они намного меньше по размеру молекулы. Эти формы обнаруживаются на ранней стадии развития, но по мере взросления животного они заменяются MAP2A и B, которые намного больше по размеру молекулы. Эти две формы включают так называемый проекционный домен, длинную вставку, которая приводит к тому, что обе молекулы работают при ~ 240 кДа на гелях SDS-PAGE. Все четыре формы содержат N-концевую область, которая включает сайт связывания цАМФ-зависимой протеинкиназы (1).Мы экспрессировали пять различных рекомбинантных форм MAP2 на основе человеческой последовательности, представленной в REFSEQ XP_006712595. Эти конструкции в комбинации покрывают почти всю молекулу MAP2 человека. Мы использовали эти конструкции для создания серии моноклональных и поликлональных антител к MAP2, многие из которых, как известно, распознают определенные сегменты MAP2.
Последовательность аминокислот 233-684 из REFSEQ XP_006712595. Это соответствует второму сегменту «проекционного домена» — длинной вставке, выраженной в MAP2A и MAP2B, но отсутствующей в MAP2C и MAP2D.Эта вставка отвечает за тонкие боковые ответвления, видимые на микротрубочках в дендритах нейронов. Конструкция экспрессировалась в pET29a и имеет несколько N- и C-концевых аминокислот, полученных из вектора, включая C-концевую His-метку.
> MAP2-P1 DLLTASKMEFHDQQELTPSTAEPSDQKEKESEKQSKPGEDLKHAALVSQPETTKTYPDKK DMQGTEEEKAPLALFGHTLVASLEDMKQKTEPSLVVPGIDLPKEPPTPKEQKDWFIEMPT EAKKDEWGLVAPISPGPLTPMREKDVFDDIPKWEGKQFDSPMPSPFQGGSFTLPLDVMKN EIVTETSPFAPAFLQPDDKKSLQQTSGPATAKDSFKIEEPHEAKPDKMAEAPPSEAMTLP KDAHIPVVEEHVMGKVLEEEKEAINQETVQQRDTFTPSGQEPILTEKETELKLEEKTTIS DKEAVPKESKPPKPADEEIGIIQTSTEHTFSEQKDQEPTTDMLKQDSFPVSLEQAVTDSA MTSKTLEKAMTEPSALIEKSSIQELFEMRVDDKDKIEGVGAATSAELDMPFYEDKSGMSK YFETSALKEEATKSIEPGSDYYELSDTRE
Технология футуристической «голограммы» обещает сверхреалистичное телеприсутствие человека
Недавно ученые попытались уловить крошечные частицы с помощью лазеров, чтобы создать трехмерные изображения, которые кажутся парящими в воздухе, с некоторым ограниченным успехом.Другие подходы создают этот эффект, используя свет, отражающийся от быстро вращающегося зеркала. Зеркало вращается так быстро, что кажется невидимым, а свет, отраженный от его движущейся поверхности, принимает трехмерную форму.
Некоторые системы виртуальной реальности также могут создавать трехмерное присутствие, но зрители должны носить гарнитуры VR, чтобы увидеть это.
И так называемые «голограммы», которые можно увидеть на некоторых стадионах, например «выступление» мертвого рэпера Тупака Шакура в 2012 году на фестивале музыки и искусств Coachella Valley, использовали вариант двумерной иллюзии, проецируемой на прозрачный экран. как «Призрак Пеппера» в честь изобретателя 19 века.
Снуп Догг (слева) выступает с голограммой покойного рэпера Тупака Шакура на музыкальном фестивале Coachella 2012. Christopher Polk / Getty Images для CoachellaВ новой системе TeleHuman 2 используется специальный отражающий экран и внешний обруч из более чем 40 проекторов. добиться трехмерного эффекта под любым углом.
Практическое применение
Vertegaal считает, что новая система отображения первоначально будет использоваться для телеконференций. По его словам, из-за относительно низкой пропускной способности Интернета и требований к компьютерной обработке для разговора между двумя трехмерными «телелюдями» потребуется всего в шесть раз больше пропускной способности, чем у современного двухмерного видеозвонка.
Конференц-залы и залы для деловых встреч — это места, которые можно оборудовать цилиндрическими «телеподами» для отображения удаленного присутствия человека, добавил он.
Эту технологию также можно использовать в развлекательных целях, например, на музыкальных шоу на стадионе, где удаленные певцы или даже мертвые звезды, такие как Тупак, могут виртуально появляться на сцене.
«Мы ожидаем, что это будет практическое решение, но наши исследования всегда на несколько лет опережают рынок», — сказал Вертегаал.«В этом весь смысл исследования».
Вертегал и его команда не одиноки в гонке по созданию трехмерных виртуальных людей.
Связанные
В Университете Южной Калифорнии исследователи уже более десяти лет работают над созданием трехмерных изображений человека с помощью различных систем. В 2009 году ученые Института творческих технологий при школе продемонстрировали трехмерный дисплей для телеконференций, в котором в качестве проекционной поверхности используется быстро вращающееся зеркало.
Пол Дебевек, профессор-исследователь из группы USC, сказал, что их самая продвинутая работа с виртуальными трехмерными людьми включает в себя массив из более чем 200 проекторов, которые проецируют изображение сзади на специальный экран.
Система использовалась для создания трехмерного виртуального изображения в натуральную величину режиссера-документалиста Моргана Сперлока, которое появилось в телевизионной передаче. New York Times также использовала проекторы для записи свидетельств переживших Холокост в своем документальном фильме 2017 года «116 камер».
Преимущества и недостатки
Дебевек считает, что дисплей Университета Королевы может испытывать трудности с отображением точного трехмерного изображения для зрителей, находящихся на разной высоте или меняющих свой рост во время просмотра дисплея.
«Вот почему мы проектируем наши системы так, чтобы изображение человека могло быть очень близко к поверхности экрана и при этом обеспечивать необходимый диапазон ракурсов», — сказал он. «К сожалению, это не работает с цилиндрическим отражающим экраном».
Но Дэвид Брэди, профессор программы визуализации и спектроскопии в инженерной школе Университета Дьюка в Дареме, Северная Каролина, считает, что дисплей TeleHuman 2 — это прогресс в направлении создания трехмерных виртуальных миров, которые можно увидеть в научно-фантастических шоу.
«Хотя он ограничен обзором только одного человека, это наилучшее приближение, которое мы имеем к естественному полноцветному трехмерному миру, изображенному в« Холодеке »из« Звездного пути », — сказал Брэди.
ПОДПИСАТЬСЯ НА NBC NEWS MACH В TWITTER, FACEBOOK И INSTAGRAM.
Проекционная структура человеческого транспортера меди CTR1 с разрешением 6 Å показывает компактный тример с новой канальной архитектурой
Аннотация
CTR1 человека является высокоаффинным переносчиком меди, который также опосредует поглощение противоопухолевого лекарственного средства цисплатина с помощью в значительной степени неизвестных транспортных механизмов.Здесь мы сообщаем о проекционной структуре 6-Å, полученной для человеческого CTR1 с помощью электронной кристаллографии двумерных кристаллов белка в двойном слое природного фосфолипида. Проекция CTR1 показывает симметричный тример шириной <40 Å. Примечательно, что центральная ось третьего порядка каждого тримера образует область с очень низкой электронной плотностью, которая, вероятно, участвует в транслокации меди. Формирование предполагаемой поры для ионов металлов на границе трех идентичных субъединиц отклоняется от структурного дизайна типичных первичных и вторичных активных транспортеров и показывает, что транспортеры захвата меди имеют новую архитектуру, которая структурно более тесно связана с белками каналов.
Медь необходима для производства АТФ в митохондриях, выведения из клетки токсичных свободных радикалов, образования соединительной ткани во время развития, выработки нейромедиатора дофамина и поддержания надлежащих потенциалов восстановления железа в плазме. Однако медь также токсична для клетки, потому что реакция с перекисью водорода может привести к образованию опасных свободных радикалов. Следовательно, клетки должны жестко регулировать гомеостаз меди посредством сложной сети мембранных транспортеров и шаперонов меди.Что касается транспорта, два семейства мембранных белков имеют решающее значение для гомеостаза меди у млекопитающих: медные насосы АТФазы P-типа, ATP7A и ATP7B, которые перемещают медь против градиента концентрации во время секреции или внутриклеточной секвестрации меди, и транспортеры CTR, которые отвечают за начальное поглощение меди клетками. Мутации, нарушающие функцию АТФаз, приводят к истощающим заболеваниям из-за токсического накопления меди в печени (болезнь Вильсона) или серьезного дефицита меди в головном мозге (болезнь Менкеса).Напротив, белки CTR еще не связаны с каким-либо болезненным состоянием у людей (1). Однако нокауты CTR являются смертельными для эмбрионов у мышей (2, 3), и недавние исследования показали, что человеческий CTR1 (hCTR1) является основным путем интернализации противоракового агента цис -платина (II) диамминдихлорид (цисплатин) в клетки карциномы яичников дрожжей, млекопитающих и человека (4–6), что свидетельствует о физиологической и клинической важности этого семейства переносчиков.
Наблюдения за тем, что hCTR1 способен транспортировать ионы меди и ионы платины, связанные с простетическими группами, озадачивают в свете того, что известно о взаимосвязях между структурой и функцией этого белка.При молекулярной массе 23 кДа мономер hCTR1 имеет только три трансмембранных домена (7, 8), которых недостаточно для образования независимой поры транслокации для ионов металлов. Соответственно, олигомеризация необходима для формирования проницаемой для меди поры, что было продемонстрировано для hCTR1 и дрожжевого CTR1, для которых были предложены модели как димеров, так и тримеров (9, 10). Более того, было показано, что олигомеризация является функционально важной (11), предполагая, что взаимодействия между трансмембранными доменами мономеров вносят решающий вклад в молекулярный механизм транслокации меди и / или цисплатина через плазматическую мембрану.Кроме того, мутагенез остатков во втором трансмембранном домене выявил положения, которые сильно влияют на поглощение меди in vivo (12, 13). Важным следствием этих наблюдений является то, что путь проникновения меди может формироваться на границе раздела между субъединицами, структурная конструкция почти исключительно встречается в канальных белках.
Здесь мы представляем прямые структурные доказательства того, что hCTR1 имеет новую архитектуру, ранее не описанную для любого другого транспортера, насколько нам известно.В частности, проецируемое изображение hCTR1 выявляет существование проницаемой для меди пор вдоль центральной оси третьего порядка тримерного транспортного комплекса, тем самым помещая структурный дизайн этого семейства транспортеров в более близкую близость к канальным белкам.
Результаты
hCTR1 N-гликозилирован по одному сайту на N-конце, Asn-15 (14), однако гликозилирование не требуется для CTR1, чтобы функционировать как высокоаффинный переносчик захвата меди (8, 15).Для увеличения молекулярной гомогенности для экспериментов по кристаллизации мы создали мутант N15Q с меткой гемагглютинина (HA), вставленной на N-конце (HAhCTR1 N15Q ). Рис. 1 демонстрирует, что HAhCTR1 N15Q является функциональным в транспорте меди, дополняя рост дрожжей, дефицитных по высокоаффинному поглощению меди (Δ ctr1 , 3 ), даже в условиях медного голодания. К счастью, hCTR1 имеет внеклеточный металлсвязывающий домен из ≈60 аминокислотных остатков (8), что позволило очистить рекомбинантный белок на кобальтовой смоле без необходимости мечения полигистидином.Таким образом, на способность hCTR1 связывать ионы переходных металлов не влияли солюбилизация или присутствие детергента.
Рисунок 1.N-концевая HA-меченная конструкция hCTR1 N15Q является функциональной в комплементации роста в условиях медного голодания. S. cerevisiae дрожжи, дефицитные по высокоаффинному поглощению меди (Δ ctr1 , 3), были трансформированы HA-меченной конструкцией hCTR1, использованной в этом исследовании (обозначенной как HAhCTR1 N15Q ) или только вектором (вектор).( Upper ) Медное голодание достигалось с пластинами, которые содержали хелатор меди батокупроиндисульфоновую кислоту (BCS) и не содержали дополнительной меди. ( Нижний ) Показан контрольный рост на чашках, содержащих избыток сульфата меди (50 мкМ) без какого-либо хелатора.
При гель-фильтрации HAhCTR1 N15Q мигрировал в виде двух различных олигомерных состояний с первым пиком (фракция 10, рис. A ), представляющая молекулярную массу, которая примерно вдвое превышала размер второго пика (фракция 13).Эти два вида были неотличимы при окрашивании кумасси или вестерн-блоттинге против НА (рис. 2). С ). Примечательно, что образование более крупной из двух олигомерных разновидностей может быть подавлено добавлением сильнодисульфидного восстанавливающего агента трис (2-карбоксиэтил) фосфина (TCEP; рис. 2). B ), показывая, что изменения в степени окисления остатков цистеина в hCTR1 влияют на его способность связываться в комплекс более высокого порядка.Лаборатория Каплана (8) ранее сообщала, что предпоследний остаток hCTR1, Cys-189, опосредует дисульфид-зависимую олигомеризацию hCTR1, обеспечивая одно возможное объяснение наблюдаемых профилей гель-фильтрации HAhCTR1 N15Q . Для дальнейшего исследования олигомерного состояния hCTR1 солюбилизированный детергентом очищенный HAhCTR1 N15Q обрабатывали тремя лизин-специфическими химическими сшивающими агентами, которые различались длиной их спейсерных плеч. В каждом случае сшивание было чрезвычайно эффективным (рис.3), что свидетельствует о наличии близко расположенных остатков лизина на границах раздела между мономерами. Однако сшивание не дало четкого ответа на вопрос, является ли hCTR1 тримерным или тетрамерным. К счастью, белок из фракции 10 образовал большие, но макроскопически мозаичные 2D кристаллы (рис. A ), гексагональная упаковка которого исключает тетрамерную организацию (рис. В ). Более того, цифровая фильтрация преобразований выявила тримеры, но разрешение оказалось недостаточным для выявления деталей структуры hCTR1.Поэтому кристаллы мгновенно замораживали в жидком этане, а изображения получали с помощью электронной криомикроскопии.
Рис. 2.Гель-фильтрация очищенного HAhCTR1 N15Q выявляет два дисульфид-зависимых состояния олигомеризации. ( A ) HAhCTR1 N15Q в отсутствие восстановителей.( B ) HAhCTR1 N15Q хроматографировали после того, как колонку предварительно уравновесили буфером, содержащим дисульфид-специфический восстанавливающий агент TCEP (1 мМ). В отсутствие TCEP димер-тример HAhCTR1 N15Q элюировался во фракции 10, а тример — во фракции 13. ( C ) Окрашивание Кумасси 10 мкл каждой из фракций гель-фильтрации 7-15 и то же самое. фракции, разведенные 1: 1000, подвергаются вестерн-блоттингу против НА. Специально указаны фракции 10 и 13.Мазок, наблюдаемый ниже полосы димера, скорее всего, отражает аномальную миграцию, вызванную гибкостью димерных частиц.
Рис 3.Сшивание очищенного HAhCTR1 N15Q . Фракцию гель-фильтрации 10 инкубировали при указанных концентрациях сшивающих агентов, реагирующих с первичным амином, различной длины спейсера (1,5-дифтор-2,4-динитробензол, DFDNB, 3 Å; дитиобис- [сукцинимидилпропионат], DSP, 12 Å; этилен гликолбис [сукцинимидилсукцинат], EGS, 16 Å) в течение 30 минут перед гашением реакции и обработкой невосстанавливающим SDS / PAGE и окрашиванием Кумасси.Кажущееся увеличение веса, вероятно, отражает различия в молекулярной массе самих сшивающих агентов, но также может быть связано с небольшими различиями в компактности сшитого олигомера.
Рис. 4.2D кристаллы очищенного HAhCTR1 N15Q . ( A ) Вид с малым увеличением плоских листов кристаллов HAhCTR1 N15Q , окрашенных 2% фосфорновольфрамовой кислотой.(Шкала соответствует 1,5 мкм.) ( B ) Вид с большим увеличением (× 37000) гексагональной решетки. (Шкала соответствует 500 Å.) ( C ) Фазовая ошибка уникальных отражений с разрешением 5 Å. Размер прямоугольников на графике соответствует фазовой ошибке, связанной с каждым измерением после усреднения данных пяти изображений и округления до 0 ° или 180 °, как диктуется центросимметричным ограничением (1, <8 °; 2, <14 °; 3, <20 °; 4, <30 °; 5, <40 °; 6, <50 °; 7, <80 °; 8, <90 °, где 90 ° случайный).Ящики показаны уменьшающимися в размере в зависимости от фазовой ошибки, а размеры 1–4 имеют индивидуальную маркировку.
Анализ данных, полученных на замороженных гидратированных образцах, подтвердил, что hCTR1 является тримерным, даже без какой-либо наложенной симметрии, что можно увидеть по треугольной границе молекулы, показанной на рис. А . Кроме того, фазовые соотношения в данных проекции показали, что кристаллы принадлежат к группе двусторонних плоскостей p 622, что указывает на двухслойную кристаллическую форму (см.рис.4 C для графика объединенной фазовой ошибки после обработки и объединения данных и таблиц 1 и 2 для статистики изображения). Двухслойная природа кристаллов была подтверждена независимо путем определения трехмерной структуры с низким разрешением из серии одноосных наклона (наклон 0–55 °) трех кристаллов hCTR1, которые были сохранены в негативном окрашивании. Объединенная по симметрии p 6, эта реконструкция ясно показала два упорядоченных слоя, которые были связаны осью вращения второго порядка между двумя слоями (рис.6 и таблица 3). Исходя из фазовых ограничений в данных проекции застеклованного образца и трехмерной реконструкции негативного окрашивания, наложение плоской групповой симметрии p 622 оказалось оправданным. Физиологическое значение контактов упаковки кристаллов между двумя слоями остается неизвестным, и для выяснения точного механизма, лежащего в основе образования димера тримеров, потребуется подробная информация о трехмерной структуре. Контурный график одной элементарной ячейки, рассчитанный с наложенной симметрией p 622, показывает две группы наложенных друг на друга тримеров.Несколько сильных круговых плотностей указывают на α-спиральную вторичную структуру (рис. 5). В ). Однако сложная двухслойная топология кристаллов не позволяет отнести эти особенности плотности к отдельным спиралям, проходящим через мембрану, или внемембранным областям молекул. Напротив, оба слоя кристалла определяют круговую область с низкой плотностью белка вокруг центральной оси третьего порядка. Размер этого отверстия ≈9 Å находится в пределах разрешающей способности данных и совместим с наличием пути транслокации меди вдоль центральной оси третьего порядка тримера.Точные размеры такой поры еще не могут быть установлены, отчасти потому, что отдельные боковые цепи аминокислот не разделены.
Рис. 5.Проекционные виды hCTR1. ( A ) Карта плотности проекции HAhCTR1 N15Q с разрешением 6 Å без принудительной симметрии ( p 1). Четыре элементарные ячейки ( a = b = 87.9 Å). Треугольники нарисованы вокруг двух наложенных друг на друга димеров тримеров в единственной элементарной ячейке, чтобы подчеркнуть треугольную форму комплекса. ( B ) Одиночная элементарная ячейка отображается с наложенной симметрией p 622. Двухслойные кристаллы содержат по четыре тримера hCTR1 в каждой элементарной ячейке. Сильные особенности круговой плотности указывают на α-спиральную вторичную структуру, но не могут быть однозначно отнесены к трем трансмембранным доменам. Область очень низкой электронной плотности на центральной оси каждого тримера hCTR1 отмечает присутствие предполагаемой проницаемой для меди поры внутри комплекса.(Шкала соответствует расстоянию 30 Å.)
Рис. 6.3D реконструкция HAhCTR1 N15Q . Стерео вид сбоку половины элементарной ячейки (два уложенных друг на друга тримера) показан с наложенной симметрией p 6. Поскольку симметрия p 6 не может накладывать второй слой во время обработки данных, эти два слоя являются действительно кристаллографическими.Таким образом, соблюдение симметрии p 622 для расчетной проекционной конструкции (рис. 5) оправдано. Расстояние 30 Å для гидрофобных ацильных цепей каждого фосфолипидного бислоя обозначено в масштабе как M h . Общее расстояние каждого фосфолипидного бислоя, включая головные липидные группы (≈45 Å), обозначено M t . Размещение этих границ является приблизительным. График имеет контур 1,2 σ.
Таблица 1.Статистика изображения (структура проекции)
Таблица 2.Статистика оболочки разрешения (структура проекции)
Таблица 3.Сводка анализа данных (3D-реконструкция)
Обсуждение
Здесь мы представляем доказательства того, что hCTR1, мембранный белок, который, как полагают, действует как переносчик для ионов меди, структурно демонстрирует тип радиальной симметрии, который наблюдается в большинстве известных структур каналов.Транспортеры (первичные и вторичные активные) составляют огромное суперсемейство α-спиральных интегральных мембранных белков с очень разнообразными гидрофобными, гидрофильными и заряженными субстратами. Почти каждая известная на сегодняшний день структура транспортера обнаруживает мономерное звено, способное образовывать независимую пору для транспорта субстратов через липидный бислой. Пока единственными исключениями из этого общего правила являются архитектура «полутранспортера», специфическая для EmrE и транспортеров кассет связывания АТФ MsbA и BtuCD, в которых субстрат транспортируется на границе раздела между двумя субъединицами (16-18).В большинстве случаев (бактериальный переносчик множественного лекарственного оттока AcrB, переносчик аммиака AmtB, обменник Escherichia coli H + / Cl —, переносчик глицерин-3-фосфата GlpT, переносчик лактозопермеазы LacY, переносчик оксалата OxlT, переносчик лейцина LeuT и p ( -гликопротеин P-gp) внутренний повтор в первичной аминокислотной последовательности соответствует псевдодвойной симметрии внутри каждого мономера (19–26). Это ключевой принцип конструкции этих транспортеров, в которых путь для субстратов формируется вдоль оси псевдодвойной симметрии.В нескольких примерах, где в трехмерной структуре отсутствует псевдодвойная симметрия (Na + / H + -антипортер NhaA, Ca 2+ -АТФаза и гомолог глутаматного переносчика Glt) независимый путь для субстратов все еще образуется в мономере белка (27–29). Напротив, функция переносчика меди hCTR1 зависит от тримерной организации hCTR1 и отличается от конструкции канонических переносчиков. Это наблюдение показано на рис.7, на которой также показано, как EmrE / MsbA / BtuCD и hCTR1 являются структурными «гибридами» между классическими переносчиками и белками истинных каналов, такими как калиевые каналы, механочувствительные каналы, ионный канал рецептора ацетилхолина, канал щелевого соединения сердца и бактериальный тип 3. системы секреции (30–35).
Рис. 7.hCTR1 организован как гибрид с каналом транспортера.( A ) В большинстве известных структур транспортеров путь проникновения содержится в одном мономере, который демонстрирует псевдодвухстороннюю симметрию. Такая архитектура видна для структур выводящего переносчика множества лекарственных средств AcrB, переносчика аммиака AmtB, обменного переносчика E. coli H + / Cl —, переносчика глицерин-3-фосфата GlpT, пермеазы лактозы LacY. , Na + / Cl —-зависимый переносчик лейцина LeuT и переносчик оксалата OxlT.В трех случаях, даже при том, что ось симметрии псевдо-второго порядка не очевидна, мономерная единица все еще образует независимую пору (переносчик глутамата Glt, NhaA и кальциевый насос саркоплазматического ретикулума). ( B ) Полутранспортеры семейства АТФ-связывающих кассет, такие как MsbA и BtuCD, имеют 6-10 трансмембранных доменов. Хотя эти спиральные пучки будут достаточно большими для размещения пор внутри мономера, эти переносчики гомодимеризуются, образуя поры для субстратов на границе раздела мономеров.Напротив, мономеры hCTR1 слишком малы для образования пор, что делает олигомеризацию обязательной для функционирования. ( C ) Наши данные подтверждают, что пора для ионов меди формируется на границе трех идентичных субъединиц, которые олигомеризуются так же, как традиционные канальные белки.
Комбинация канальной архитектуры с унипортерной пропускной способностью ионов меди поднимает несколько важных вопросов о механизме, с помощью которого CTR1 транспортирует медь.Во-первых, почему hCTR1 не может быть в механизме каналом с высокой магнитной индукцией? Ядовитая природа ионов меди требует, чтобы этот металл всегда был прочно связан с белками, чтобы предотвратить образование опасных свободных радикалов в клетке или образование металлической меди в результате диспропорционирования. Неудивительно, что белки, участвующие в гомеостазе меди, обладают очень высоким сродством к металлу, так что вероятность обнаружения свободных ионов меди в клетке приближается к нулю (36). Медь также не существует в свободном виде в кровотоке, при этом большая часть координируется с церулоплазмином, а остальная часть связана с альбумином и аминокислотами.Таким образом, контролируемая координация ионов меди непосредственно перед, во время и после прохождения через hCTR1 наиболее совместима с медленным транспортным циклом, регулируемым обменом ионов меди с белками доставки, внутриклеточными шаперонами и / или хелаторами с низкой молекулярной массой, такими как глутатион. Эта точка зрения подтверждается недавней работой, показывающей, что изолированный С-конец дрожжевого CTR1 может отдавать ионы меди в шаперон меди Atx1 in vitro (37), а работа Эйссеса и Каплана (8, 38) продемонстрировала, что hCTR1 транспортирует медь с высокое сродство и относительно низкая текучесть кадров.Тем не менее, транспорт меди через hCTR1 является пассивным, поскольку ни ингибиторы синтеза АТФ (антимицин, олигомицин и азид натрия), ни уабаин, ингибитор Na + / K + -АТФазы, не влияют на поглощение меди (9).
В соответствии с пассивным транспортным механизмом на нашей карте плотности проекции присутствует, казалось бы, беспрепятственная пора. Однако отсутствие каких-либо очевидных барьеров поднимает вопрос о том, какие молекулярные детерминанты в hCTR1 являются критическими для контролируемой транслокации меди через мембрану и как они вносят вклад в механизм транспорта меди.Хотя для окончательного ответа на этот вопрос необходимо дождаться информации о трехмерной структуре, аминокислотные последовательности белков CTR и несколько исследований мутагенеза указывают на критический вклад N- и C-концов, а также TM2 и TM3. В частности, почти каждый член семейства CTR имеет потенциальные мотивы связывания металлов как на внеклеточном N-конце, так и внутриклеточном C-конце, где они идеально расположены для координации поступления и обмена металла с шаперонами во время предполагаемого транспортного цикла hCTR1 in vivo .Однако в отсутствие меди эти участки могут быть в основном неструктурированными и, следовательно, не будут вносить вклад в нашу карту плотности проекции.
Хотя N- и C-концы могут вносить значительный вклад в общий механизм транспорта меди, необходимы дополнительные детерминанты для обеспечения контролируемой транслокации через бислой. Например, была установлена важность мотива MxxxM на внеклеточном конце TM2 (12). Совсем недавно лаборатория Каплана (38) показала, что дополнительные остатки на TM2 также влияют на транспорт in vivo , а исследование TM3 показало важность мотива GxxxG (GG4) для олигомеризации и функции CTR (11).Необходимо установить точное взаимодействие между этими различными элементами. Однако было показано, что мотивы GG4 играют критическую роль в структуре некоторых мембранных белков. Такие роли включают внутримономерную межспиральную упаковку, наблюдаемую в водном канале аквапорина-1 (39), и образование межсубъединичной олигомеризации, как в гликофорине A (40), и через связанный мотив AG4, как в механочувствительном канале MscS (31). Остатки глицина также играют важную роль в конструкции фильтра селективности в калиевых каналах и служат в качестве стробирующих петель в KcsA и MthK (41).Примечательно, что глицины мотива GYG в фильтре селективности калиевых каналов находятся в пределах 5,4 Å друг от друга и их родственников, связанных с симметрией, в функциональном тетрамере. Рассматривая эти пространственные отношения, подобный набор ограничений может, в принципе, быть создан путем ориентации мотива GG4 на TM3 по направлению к границе упаковки вдоль центральной оси третьего порядка тримера. В такой модели мотив GG4 на TM3 будет вносить вклад как в селективность, так и в «стробирование», в то время как состояние ворот может регулироваться заселенностью внеклеточных и внутриклеточных сайтов связывания металлов.Кроме того, эта модель предполагает, что тримерная природа hCTR1 отражает адаптацию к его физиологическому субстрату (ионам меди), которые при радиусе координации между 0,68 и 0,91 Å значительно меньше, чем ионы калия, поток которых опосредуется каналами, которые тетрамерны по архитектуре.
Структура hCTR1, описанная здесь, представляет собой краткий обзор переносчика, имеющего чрезвычайно важное значение в развитии млекопитающих и химиотерапии человека. Область с низкой электронной плотностью четко визуализируется в центре тримера hCTR1 и представляет собой прямое визуальное свидетельство наличия поры для ионов меди.Трехмерная реконструкция hCTR1 из серии замороженных гидратированных кристаллов позволит более детально изучить трансмембранную спиральную упаковку и назначение. Кроме того, структурные данные с высоким разрешением о hCTR1 помогут понять, как этот белок может переносить ионы меди по сравнению с противораковым соединением цисплатина, которое координируется с простетическими группами.
Материалы и методы
Экспрессионные конструкции и трансформация дрожжей.
КДНКhCTR1 и штамм Saccharomyces cerevisiae Δ ctr1 , 3 были получены от Джейн Гитшер (Калифорнийский университет, Сан-Франциско).Инициирующий метионин hCTR1 был заменен меткой HA (MEYPYDVPDYA) для достижения HAhCTR1 в качестве ORF. N-связанное гликозилирование hCTR1 было устранено (N15Q). HAhCTR1 N15Q лигировали в вектор pDB20, как описано для исследований комплементации, и в плазмиду Pichia pastoris pPIC3.5K для сверхэкспрессии и очистки. Штамм дрожжей Δ ctr1 , 3 трансформировали с использованием ацетата лития, и клетки отбирали для комплементации урацила, высевая на планшеты с минимальной декстрозой, содержащей декстрозу (2%), аденин, гистидин, лизин и триптофан (все по 20 мг / литр), но без урацила. Pichia штамм SMD1163 (Invitrogen) был электропорирован (микропульсер BioRad) и подвергнут одному раунду отбора на планшетах с базисной декстрозой для регенерации без гистидина и второму этапу отбора на планшетах дрожжевого экстракта / пептона / декстрозы, содержащих 0,75 мкг / литр G418, все в соответствии с инструкции производителя (MultiCopy Pichia Expression Kit; Invitrogen).
Функциональное дополнение.
Анализыбыли настроены в основном, как описано (11).Вкратце, дрожжи один раз промывали стерильной дистиллированной водой и доводили до OD 600 1,0 в воде. Пять серийных разведений (1:10 последовательно) наносили на планшеты дрожжи / пептон / глицерин, содержащие глицерин в качестве единственного источника углерода [1% (вес / объем) дрожжевой экстракт, 2% (вес / объем) бактопептон, 3% (объем) / об.) глицерин] с добавлением 50 мкМ батокупроиндисульфоновой кислоты (Sigma) для истощения запасов меди или 50 мкМ сульфата меди для избытка меди.
Очистка HAhCTR1
N15Q .Двухлитровые культуры P. pastoris , экспрессирующие HAhCTR1 N15Q , инокулировали из ночных культур и выращивали в биоферментере [Inceltech (Тулуза, Франция) LH Series 210] в течение 50–60 часов с 3% глицерина в качестве единственного углерода. источник. Экспрессия HAhCTR1 N15Q индуцировалась после полного потребления глицерина добавлением метанола (3,6 мл / ч на литр объема культуры) в течение 4–12 часов в присутствии не менее 30% растворенного кислорода. Клетки лизировали за один проход через разрушитель клеток (Z Plus Series; Constant Cell Disruption Systems, Daventry, U.K.) при 40 000 фунтов на квадратный дюйм. Стенки клеток и остатки были удалены низкоскоростным центрифугированием (600 × г ; ротор Beckman JA-10, 20 мин, 4 ° C), и все мембраны были получены вторым вращением при 35000 об / мин в Beckman type 45 Ti. ротор в течение 15 мин при 12 ° C. Мембраны ресуспендировали в буфере (280 мМ NaCl / 10 мМ Mops, pH 7,4) и гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе Dounce на льду. Суспензию мембран солюбилизировали добавлением 3% Triton X-100 (Anatrace, Maumee, OH) при перемешивании в течение 20 мин при комнатной температуре.Нерастворимый материал удаляли центрифугированием при 40000 об / мин (ротор Beckman типа 45 Ti, 22 мин при 22 ° C), и 10 мМ имидазол добавляли к супернатанту перед аффинной хроматографией с металлом. HAhCTR1 N15Q очищали прямым связыванием с аффинной смолой с металлическим кобальтом (Talon Superflow; BD Biosciences). Детергент заменяли, промывая шарики буфером, содержащим 10 мМ имидазол и 4 мМ децил-β-мальтозид (Anatrace). Белок элюировали буфером, содержащим 30 мМ имидазол, и концентрировали (Centricon YM-100; Millipore), и партии подвергали гель-фильтрационной хроматографии (Superdex 200 10/300 GL; Amersham Pharmacia Biosciences) при скорости потока 0.3 мл / мин в буфере (280 мМ NaCl / 10 мМ Mops / 4 мМ децилмальтозид, pH 7,4). Стандарты гель-фильтрации Bio-Rad использовали для калибровки колонки для гель-фильтрации.
2D Кристаллизация HAhCTR1
N15Q .Белковые препараты HAhCTR1 N15Q из фракции гель-фильтрации 10 разбавляли до конечной концентрации 0,3–0,5 мг / мл в буфере до конечной концентрации 280 мМ NaCl, 10 мМ Mops, 2 мМ EDTA, 4 мМ децилмальтозида, pH 7,4 в общем объеме 100 мкл.Добавляли диолеоилфосфатидилхолин до конечного отношения липидов к белку 0,7 (масса / масса), и раствору давали возможность перемешиваться в течение 1 часа при встряхивании при 26 ° C. Кристаллы выращивали путем переноса раствора в блоки минидиализа (отсечка 10 кДа; Pierce Slide-A-Lyzer) и диализовали против того же буфера без детергента в течение 24–48 ч при 26 ° C.
Электронная микроскопия.
Было просеянокристаллов и были взяты серии наклона с использованием кристаллов HAhCTR1 N15Q , окрашенных фосфорновольфрамовой кислотой, на электронном микроскопе Philips Technai 12, работающем при 120 кВ.Наилучшая адгезия кристаллов к сплошной углеродной пленке была достигнута путем нанесения смеси на сетки с углеродным покрытием после 45-секундного тлеющего разряда в присутствии амиламина с использованием устройства для нанесения покрытия распылением (SCD005; BAL-TEC, Tucson, AZ ) установлен на разрядный ток 45 мА. Чтобы заморозить кристаллы в полностью гидратированной форме, сетки аналогичным образом испускали тлеющим разрядом, образец прикладывали к сетке в холодном помещении, и избыток жидкости удаляли в течение 6–7 с, а затем быстро погружали в жидкий этан. Изображения были получены при температуре образца (−172 ° C) в условиях низкой дозы (≈10 e — / A 2 ) на микроскопе Philips Technai F20, оборудованном автоэмиссионной пушкой, работающей при ускоряющем напряжении 200 кВ, номинальное увеличение 50 000 и значения расфокусировки от -4 500 до -12 500 Å.Изображения были записаны на пленку Kodak SO-163 и проявлены в течение 12 мин в полноразмерном проявителе Kodak D19.
Обработка изображений.
Электронные микрофотографии были оцифрованы с использованием прецизионного сканера (SCAI; Zeiss) с размером пикселя сканирования 7 мкм (1,4 Å на уровне образца). Хорошо упорядоченные области от 3000 2 до 4000 2 пикселей были идентифицированы расчетным прямым преобразованием Фурье с использованием программы ximdisp (42). Изображения были скорректированы на искажения решетки, эффекты передаточной функции контраста и астигматизм с использованием пакета программ обработки изображений mrc (43).Были использованы два прохода разгибания с эталонной площадью 10% от общей площади пикселей для первого прохода и 5% для второго. Пять изображений были объединены в группу плоскостей p 622, и обратный температурный фактор B = -320 оказался достаточным для компенсации зависящего от разрешения затухания в амплитудах (44, 45). Окончательная карта плотности проекции очерчена до 0,266 × стандартное отклонение гистограммы плотности.
Благодарности
Мы благодарим Джейн Гитшер за подарок кДНК hCTR1 и Δ ctr1 , 3 штамм дрожжей.Эта работа основана на диссертации С.Г.А., представленной для частичного выполнения требований к степени доктора философии Йельского университета. Эта работа была поддержана грантом T32 GM07223 Национальных институтов здравоохранения (для S.G.A.), предварительной стипендией F32 NS45550 (для S.G.A.) Национальной исследовательской службы, стипендией для семьи Хеллмана и грантом GM071590 (для V.M.U.) службы общественного здравоохранения.
Сноски
- * Кому следует направлять корреспонденцию.Эл. адрес: vinzenz.unger {at} yale.edu
Вклад авторов: S.G.A. и В.М.У. спланированное исследование; S.G.A. проведенное исследование; S.