Сайт Veronika Stepanova www.youtube.com/channel/UCg0Y6Q0m3A_5X0CPY-IG3Yg — «Психолог? Да ладно!»
Запрос в поисковике «Психологическая помощь» выдает 5 миллионов результатов, а это значит, что интерес к психологии в настоящее время очень велик.
Психолог — одна из помогающих профессий, а значит, очень важно понимать, с кем придется общаться потенциальному клиенту. И к чему может привести обращение к шарлатану или гурствующему дельцу от психологии. Увы, на просторах Интернета и вне его таких «специалистов» немало.
Знакомьтесь с одним из них — Вероника Степанова. Вы думаете, у неё нет психологического образования? Отнюдь. Вероника гордится, что закончила СПбГУ, по кафедре клинической психологии. Есть и дополнительное образование, и даже опыт стажировки в клинике им. Бехтерева. Казалось бы, неплохое резюме настоящего специалиста. С чем же вы встретитесь на самом деле, зайдя на Ютюб-канал Вероники Степановой?
Стоит ли смотреть ее канал? Узнаете ли вы что-то по-настоящему полезное о психологии и психологах? На эти вопросы есть только один ответ – «НЕТ!».
Практически все люди задаются вопросом, как стать ярким, уверенным в себе человеком, как избавиться от «зажимов» и научиться общаться, и как защищать себя? Что нужно, чтобы найти близкого себе человека, а найдя его, как сохранить с ним отношения? Перечень этих важных вопросов длинен, и сейчас за ответами на них люди обращаются в сеть. Кто только об этом не писал, не говорил и не снимал роликов для сети! Вот и Вероника Степанова занимается этим же.
Тогда почему не стоит смотреть её канал? А вы хотите, чтобы вас считали хамом и ментором, способным лишь на то, чтобы грубить, оскорблять и презрительно высмеивать окружающих людей? Хотите, чтобы ваши отношения превратились в войну? Чтобы на всем, что для вас дорого, висели ценники? «Специалистов» предлагающих обучить подобным «техникам отношений» немало. Если вам близок этот стиль общения, можете закрывать отзыв, он вам не понравится. Если же вы ищете настоящие, гармоничные отношения, Вероника Степанова не сможет научить вас этому.
Предупреждаю — много букв. Если напрягает читать, вы в своем праве — возвращайтесь на канал Вероники, она раскроет вам глубокую психологическую тайну, как «бзднуть, чтобы никто не заметил». Готовы? Тогда вперед.
Почему не стоит тратить время на Веронику Степанову и ее контент.
Она популярна, и люди ее смотрят. Красивая брюнетка, проживающая в Майами. Ведет свой канал на Ютюбе с 2012г. Лучший российский психолог из страны мечты… На канале на сегодняшнее число 1 миллион 280 тысяч подписчиков. Это величина. Казалось бы — вот факты, это успех-успех.
Но не всё так просто. Ощущение, которое появляется при просмотре монологов ведущей канала — вульгарность. Вероника кажется самозванкой, а не специалистом. Ловкой горничной миледи, пробравшейся в будуар госпожи. Глазки блестят, и про «про амурное» болтаем… Тоже могём. Почему консультант из магазина косметики не может потягаться с Изабеллой Росселини? Да может, чё. Только держись!
Вероника Степанова в кадре
Вероника Юрьевна Степанова восприняла буквально призыв «Продавайте себя, делайте из себя бренд!» — вот она и продает.
Получите. Еще немного Вероники Степановой — как есть и с матерком. Бренд же. Она же правдива. Режет правду-матку. В глаза. Только эта правда того же рода, что у бабки в панамке, сидящей у подъезда. Такая же токсичная и такая же перекошенная. Недобрая.
Вероника не ведет себя как представитель помогающей профессии, как человек, по своему призванию работающий с людьми. Скорее наоборот. Вот Андрей Курпатов и Екатерина Михайлова — психологи. А Вероника — явление из другого ряда. Вероника, к сожалению, интересуется только собой, исключительно собой и больше ничем. Но это не психология. Это эгомания.
Если вы считаете, что поглядывая такой канал, вы многому научитесь… Это заблуждение. Подражая Степановой, вы, может, и поразите воображение пары недругов, сразите их пикантной разговорной лексикой, но скорее, получите клеймо грубого и зацикленного на сексе персонажа, от которого трудно избавиться (и от клейма и от персонажа). Хотите послушать про сексуальные извращения, перверсии, отклонения и способы их адаптации? Так это не самый компетентный источник, поэтому научно-популярной информации не ждите (о компетенциях — чуть позже).
Заставка канала В.Степановой. Из 10 роликов — 7 про сексуальные отношения.
Ролики на канале у Вероники Степановой выходят практически каждые три дня.Давайте задумаемся, может ли психолог с обширной практикой так часто генерить контент? Поиск темы, план, текст, съемка, монтаж. Время, труд, время.
А как же консультации? Поиск литературы по теме, общение с коллегами и супервизором? После консультаций тоже особенно не бегается, не трещится и не скачется, затратная это работа.
Вы хотите больше узнать про психологию, ведь Вероника позиционирует себя как психолога, а получаете пошловатые рассуждательства в дворовом стиле, от «своей в доску» бедовой соседки.
В разбитной и энергичной манере Вероника несет фигню, как нечто сенсационное и важное, в мозг одурачиваемых ею масс.
Про «пощекотать писулечку» (это прямая цитата, а перлов таких у мадам Степановой склады), про то, кто и откуда слизывает сперму…. Это, я вас спрашиваю, психология?! Вот это?
А тогда Эрих Фромм, Виктор Франкл, Вирджиния Сатир, Ирвин Ялом, Джеймс Бьюдженталь — они кто? Они получается, вне психологии? И они, конечно, не знают, как получать оргазм и что ж такое при этом и откуда выделяется? А Вероника щедро делится полученными знаниями. Впитывайте.
Далёкому от психологии зрителю при просмотре монологов мадам Степановой в голову приходят простые мысли: «Как?! И это — психолог? А за что эта женщина на консультации может брать деньги?! За эти байки, не-будем-уточнять-откуда? И замусоленную околосексуальную ерунду?».
Тематика роликов Вероники вся какая-то сексуально-центрированная. Народ якобы это смотрит. Оргазмы, оральный секс, нетрадиционная ориентация, первый секс… Да сколько ж можно?! Клоунанда, бахвальство, и самоуверенность…
Интимных проблем нет.
Вероника рассказывает, что делать с преждевременной эякуляцией…
Про романы с женатыми мужчинами.
Ее книга такая же, ужасная, как и сама мадам. Посыл простой: она так успешна, что все ей завидуют. Она прямо-таки мерило успеха: «У тебя, Степанова, все есть: муж, карьера, дети…» Это цитата. И опять — про секс, вашу неудовлетворённость и вероникину успешность т.д.
Да мне все равно, есть у Степановой муж, дети, карьера… А вот психология меня интересует. И подменять одно другим, называя это маркетингом и личным брендом — просто нечестно. Отметим, что таких атас — специалистов, помешанных на пиаре личного бренда, в последнее время полно. Строчат свои опусы так, что клавиатура затирается.
Выглядит ли Вероника уверенной в себе? Да, очень.
Выглядит она компетентной? Однозначно, нет. Как любой «не-вполне-специалист» она даёт однозначные и категоричные ответы, которые мы так хотим слышать, когда чего-то не понимаем. Специалист обычно долго выспрашивает детали, и потом начинается — с одной стороны, с другой, что было сначала, что потом, куда пойдем — лучше так, а можно эдак, чего вы хотите, а чего не хотите, не стоит так и так, потому что вы потом будете испытывать это и это, и лучше избегать того и сего.
.
О Боже, неужели трудно сказать одним словом?! Нет. Нетрудно. Это — к Степановой. Она вам все объяснит. Все будет проще некуда, а что делать с этой простотой, не знает даже мадам Степанова. Восторгов после ее индивидуальных консультаций что-то неслышно.
Вероника отвечает на вопросы и советует, как поступить
Только вот… психология ли это?
Давайте еще раз обратимся к информации о квалификации В. Ю. Степановой. На сайте Герценовского университета (можно найти в сети) довольно подробная информация о её компетенциях и подготовке. Но поскольку сексуальная тематика и отношения полов чуть ли не основная тема на канале, мы будем акцентировать внимание на подготовке в области практической психологии, консультирования, сексологии и сексопатологии.
Начинала свой трудовой путь В.Ю. Степанова как медсестра (средне-специальное образование), затем училась на фармацевта, потом ее жизнь забросила за дополнительным образованием в институт психологии «Теменос», где в начале 2000-х удовлетворяли свое любопытство многие, проходя тренинги личностного роста.
Затем, в 2008г, Вероника получила диплом СПбГУ — тогда было много программ по дополнительному образованию и второму высшему.
Вопрос о диссертации за авторством В. Ю. Степановой поднимался в сети каждый раз после очередного ляпа Вероники Юрьевны. Диссертацию она действительно пыталась в педуниверситете написать, начиная с 2009 г. — о подростках и их зависимом, отклоняющемся поведении… Как минимум, над исследованием работают три года.
Ничего пока не тревожит? Защитила ли В.Ю. диссертацию — неизвестно. Сведений нет. Но если бы смогла — каждый её подписчик твердо бы это знал, а на тоненькой книжке Вероники Юрьевны был бы скан диплома кандидата наук. Канал мадам Степанова создала в 2012г. И проживает в Майами… Пока нет вопросов?
А у меня есть. Был ли у Вероники опыт консультирования? Достаточной, многочасовой самостоятельной работы, на в рамках стажировки, а с супервизией и всем, что полагается? Где же? В каком объеме? А специализация по сексологии и сексопатологии? Где же яркая «звезда-ютюб-психологии» получала знания о человеческой сексуальности? Есть ли у нее практика и профессиональное общение сейчас, по месту жительства?
Где же? Судя по тональности и глубине рекомендаций, специальные знания Вероника Юрьевна получала из житейского опыта, сериалов и в Интернете.
То, что жителям Майами доступен сервис личных психологических консультаций Вероники Юрьевны — сильно вряд ли. Иначе мы бы знали, что это лучший психолог Майями и его окрестностей, и первый психотерапевт после Фрейда…
Вы готовы и дальше слушать ее пересуды в стиле «дворовые рассказы» — и все «про это»? Ну, ваша воля. Кому скучно, кому — самая интрига.
Опять про одно все, про одно… Но серьёзно-то то как!
После просмотра таких роликов как — то трудно поверить, что В. Ю. Степанова — кандидат психологических наук или исследователь, работающий над диссертацией. Если человек сам писал диссертацию, то опыт чтения литературы, анализа прочитанного, проведение собственных исследований, написание выводов бесследно пройти не могут. Что — то остаётся. Что немало важно, диссертация пишется под руководством научника и стиль изложения материалов должен соответствовать общепринятым научным стандартам.Вы видите эти умения в Веронике? Ну, если считать, что у нас психологом по жизни становится каждый, тогда да.
Будем правдивы. Профессиональный потенциал Вероники Юрьевны равен четкой круглой цифре — нулю. В своих роликах она не единожды выбалтывала и истории своих клиентов, и выражала снисходительное и пренебрежительное отношение к ним и их проблемам. В своих мнениях она слишком проста. Вы поверите, что она внимательно кого-то слушает, уточняет услышанное, сверяется правильно ли поняла, отражает чувства?
Как психолог, консультирующий и практикующий, мадам Степанова просто непригодна. Это не раз обсуждалось в сети — у нее нет ни уважения к клиентам, ни к профессии, к представителям которой она имеет фантазию себя относить. И зрители канала пишут об этом — что ни за что к ней бы не пошли. Почему? Добра ли она? Деликатна ли? Каков ее культурный уровень? Я думаю его определить довольно просто — агрессивная вульгарность и маскирующаяся под профессионализм циничная пошлость.
Кто -то скажет: «Она простая, смелая, красивая». Да, она такая, и это потому, что она очень далеко находится от тех, кого «поучает».
И ей плевать и на вас, и на ваши проблемы, она мечтает превратить это в свои доходы, славу, успех.
Вероятно, посчитав невыгодным реализовываться в профессии, ведь клиента нужно слушать, его нужно уважать и бережно относиться к его проблемам, его чувствам, его личной трагедии, какая бы она ни была, Вероника Степанова решила: «Зачем такие сложности?! Гораздо проще зарабатывать на личном бренде!».
И что удивляться, что если — Елена Малышева у нас реальное и незаходящее светило медицины, тогда мадам Степанова — знаток человеческой души. Хренак, и все разъяснила, а внутренний мир тех, о ком она говорит — на помойку.
Вы скажите, как же так, ведь она замужем, у нее есть дети. Значит, она знает, о чем говорит. Она успешна в этом смысле. Но это ничего не говорит о ее профессионализме.
Во-первых, о её благополучном и гармоничном браке мы знаем только с её слов. Во-вторых, даже если что- то она и обсуждает перед выходом ролика со своим мужем, то кто и какую позицию занимает в этом обсуждении, нам тоже не известно.
И главное, наличие у человека постоянного партнера и детей, не говорит о его умении строить и поддерживать отношения. И, кроме того, известны многочисленные примеры наличия семей у самых равнодушных и жестоких психопатов.
Так в чем же кроется секрет успеха В. Ю. Степановой? Кто будет слушать весь этот наполненный «сельским этикетом» фонтан?
Правильно, тот, кто хочет быть в центре внимания, кого зачатую не слушают, и кто очень хочет быть услышанным. Кого волнуют темы из жизни пиписек больше, чем что-либо еще. Подростки. Девушки и молодые люди, которым трудно общаться. Трудно привлечь интересного партнера. Трудно дать достаточный отпор. Трудно конфликтовать, отстаивать свою точку зрения. Им представляется, что в грубости и мате — сила и убедительность. Им кажется, что усвоив манеру общения очень разбитной и бывалой девахи, они решат все свои проблемы и избавятся от затруднений. Станут востребованы, популярны, постоянно приглашаемы везде и всюду.
Ну и свобода в обсуждении сексуальных тем – это привлекательно.
Вероника тут без преувеличений — порноспикер. Все разъяснит. Куда, когда, кому… Кладезь. Быть неопытным и невинным в 21-веке — это выглядеть слабым и жалким, не иметь «особенного» опыта или, хуже того, быть верным — повод краснеть каждый раз, когда к тебе обращаются (если тебе пока еще не 25 лет, потом становится по фигу)… Но фишка в том, что эта манера липучая и громкая, как дурные духи, будет преследовать заразившегося бесконечно. И попытки избавиться от нее потребуют куда больше усилий, чем ее усвоение.
Вероника отвечает на вопросы и советует, как поступить
Вот из роликов остаётся ощущение, что Вероника в принципе никого не слушает, потому что не может, не представляет, что это такое. Учиться ей не надо было вообще. Она и так всё знает. С детского сада. Ей понятно, как быть счастливыми вам, как разрешить проблемы, как похудеть, как заниматься сексом, как… Для нее вообще проблем не существует. Ни психологических, никаких других. Да и психологии на ее канале, как таковой, тоже нет.
Не думаю, что после просмотра «творчества» этой тётеньки, о психологах будут думать хуже, и обращаться к ним за помощью реже. Хотя, наверно есть люди, которые могут думать: «Пока посмотрю психологов на Ютюбе, попробую разобраться, а потом, может и пойду». И вот вам психология в исполнении яркой и уверенной Вероники…И это ошибка. Лучше идите к психологу. К хорошему. Который не строит злых гримасок в сети.
Не смотрите эту муру. От просмотра многих вероникиных видео становится безнадежно и так тошно, будто съел что-то испорченное… Если психология такая — то какой смысл к этим психологам идти?
Но в том-то все и дело, что психологи в большинстве своем не такие. Они действительно слушают. Они действительно пытаются помочь разобраться и придумывают терапию, которая учитывает твои особенности и обстоятельства. А Вероника — какой-то околопсихологический фрик.
Не знаю, уж как смотрит ее семья на всё это «производство контента» — когда мадам на пятом десятке, сидя перед камерой в офисном кресле, наряженная в деловую рубашку (серьёзка же!), вещает про письки, сиськи, маньяков и способы портить воздух, попутно матюгаясь и неистово размахивая лапками.
… Красота. Психология — она такая, товарищи. Это просто успех. Грандиозный и ошеломительный. Оскар и нобелевку по психологии в студию. Немедленно!
Один настоящий психолог и настоящий доктор наук, Татьяна Владимировна Черниговская (ее роликов немало в сети) все время повторяет: «Мозг — не помойка!», это о том, что нужно следить за качеством информации, которую мы потребляем. Не удивляйтесь, если вы будете смотреть видео, передачи и слушать подкасты, где люди беспрерывно орут друг на друга, хамят, обесценивают оппонентов и оскорбляют их, вам становится тоскливо, других людей вы воспринимаете очень критично и с раздражением, и через некоторое время заметите, что все вокруг почти плохо и жизнь не мила, хотя вроде нет особых причин. Меняйте информационную диету.
И, прежде всего, очистите ленту от комнатных скандалистов и «порноспикеров» вроде Вероники, на канале которой слово «миньет» (транскрипция в редакции автора канала) звучит чаще, чем слова «чувства», «переживание», «мысли».
И похоже в этом же жанре Вероника намерена пробавляться долго, хоть до 70 лет… А что? Смотрят же.
Только почему-то у меня остаётся ощущение, что в мире, где будет много Вероник Степановых, не будет Данте, Петрарки, Ботичелли, Цвейга… Потому что они задроты и мямли. Даже Бальзак недостаточно крут и харизматичен — так, дурачок. А Джейн Остен жалкая старая дева, Франсуаза Саган – нелепая потаскушка. Вероникам нравится реальный Пабло Эскобар. Недавно она пела оду мексиканским мужчинам – их щедрости и харизме. Похоже, сериалов Вероника пересмотрела. А политическую хронику «ниасилила».
Про альтернативы. Если будет время, посмотрите старый цикл передач Александра Гордона о психологии и психологах, снятый для тех, кто, как говорил ведущий, интересуется психологией и тех кто пока не очень. И сравните.
И, может быть, тогда вы увидите, что очередной Златопуст Локонс – Вероникус Степанус пытается украсть драгоценное время вашей жизни. А может, вернетесь на канал самого популарного психолога Ютюба .
Решать Вам.
Всех благ и всего самого интересного.
Вероника Степанова — фото, биография, личная жизнь, новости, «Ютуб»-канал 2021
Биография
Несмотря на то, что в 2019-м Китай исследовал обратную сторону Луны, а Илон Маск провел испытания двигателя для межпланетного корабля Starship, в России все так же стыдятся ходить к психологу. Одни считают, что эта процедура — пустая трата денежных средств и времени, а душу можно излить друзьям за рюмкой чая. Другие убеждены, что раскрыться перед посторонним человеком полностью все равно не получится.
Психолог Вероника СтепановаОднако, как в том меме, современные проблемы требуют современных решений — на помощь приходят блогеры, их видео и консультации онлайн. Вероника Степанова, например, подскажет, как выйти замуж за богатого иностранца или обрести уверенность.
Детство и юность
В середине последнего летнего месяца 1978-го, 14-го числа, Северная столица пополнилась новой жительницей — в петербургской семье родилась дочь, которую наделили красивым именем Вероника.
Исчерпывающей информации о ее ранней биографии, кем работали отец Юрий с матерью и есть ли у нее братья, сестры, к сожалению, нет. Зато известно, что в положенный срок девочка пошла в первый раз в 1-й класс местной «счастливой» школы под номером 77.
О своем дальнейшем образовании женщина подробно рассказала на официальном сайте. Высшее она получила на психологическом факультете СПбГУ. Список учреждений, где училась дополнительно, значительно длиннее — НИПНИ имени Владимира Бехтерева, одноименный медицинский центр, Институт психологического консультирования, РГПУ имени Александра Герцена, петербургские фельдшерский колледж, базовый фармтехникум, наркологическая больница и многое другое. И как вишенка на торте — Portland State University в США.
«Я клинический психолог с рождения, с детских лет влюбилась в патологии и любые их проявления, наибольший интерес вызывали “не такие, как все” и наблюдение за ними.Вероника СтепановаИменно это толкнуло меня на пожизненное студенчество. Изучение, исследования, анализ, сравнение — это меня завлекло», — признавалась она.
И хотя о семье и родителях Вероника предпочитает не распространяться, но охотно помогает другим. На ее «Ютуб»-канале размещены видеоролики, посвященные проблемам отцов и детей и зачастую нелегким отношениям матерей и дочерей: «Многодетные семьи. Зачем?!», «Ребенок — свидетель родительской измены», «Как полюбить мать? Психология конфликтов», «Как вырастить психически здорового ребенка», «Нежеланный ребенок. Последствия» и все в этом духе.
Психология
Как признавалась Степанова в редких интервью, психология захватила ее раз и навсегда. Но занималась она ею почти на бесплатной основе, что называется, сидя на шее у мужа — консультировала наркозависимых и работала в клиниках за маленькую зарплату. Постепенно пришла и укрепилась светлая мысль, что полученные каждодневные знания можно попробовать продать, и начался штурм Интернета с его безграничными ресурсами.
Вероника стала автором статей и записывала первые видео, которые публиковала на Youtube.
Во второй день лета 2019-го она выложила ролик, записанный, судя по всему, еще в квартире, с названием «Это такой ржач! Мое первое закрытое видео 7 лет назад», где подняла животрепещущую и благодатную во все времена тему «Как завоевать сердце мужчины». Конечно, на самом старте виртуальной карьеры манера подавать информацию и себя отличалась от онлайн-лекций Вероники Юрьевны сейчас.
На вопрос интересующегося пользователя TheQuestion.ru Александры Шевченко в 2018 году о том, как обычно проходит день Степановой, ответ поступил подробный. Подъем в 06.30 утра, стакан воды, полезный завтрак, прогулка, посещение спортзала, обед, запись ролика, ужин, снова прогулка, просмотр сериала, секс и отбой.
При этом насыщенный день разбивают как минимум три обязательные консультации по скайпу – в 09.00, 11.00 и 14.00.
С годами шикарная брюнетка (некоторые фолловеры признавались, что именно ее красота и приятный голос повлияли на подписку на канал) расширила сферу деятельности, открыв авторскую психологическую онлайн-школу и опубликовав книгу. Произведение, по отзывам прочитавших, вобрало в себя сжатые пересказы блога автора.
Помимо разговоров на психологические темы, Вероника Юрьевна позиционирует себя и как сексолог, о чем красноречиво свидетельствует хештег под ее постами в «Инстаграме» и соответствующие онлайн-выпуски с провокационными заголовками: «Лучшие позы», «Любовные шалости», «Казусы в постели. Деликатные проблемы в совместной жизни», «Сексуальная несовместимость».
Личная жизнь
Пожалуй, главной «фишкой» клинического психолога является то, что сказанное она подкрепляет делом. Если подняла семейные вопросы, то демонстрирует неподдельно счастливые фотографии детей. Если заговорила о взаимоотношениях между мужем и женой, то снабдила в социальных сетях снимком из личной жизни.
Вероника Степанова с мужемВероника Степанова давно замужем, но явки, пароли, ссылки в социальных сетях и имя супруга называть не торопится. Любимому человеку женщина подарила двух девочек — Сашу и Серафиму. Старшая дочь Александра в мае 2019-го окончила Орегонский университет, младшая увлеченно занимается танцами, изучает испанский и играет на пианино.
Вероника Степанова с дочерьмиСемья, проживающая в Майами, вместе посещает культурные мероприятия, много путешествует, пробуя в новых странах изыски национальной кухни и соглашаясь на экстремальные экскурсии.
Вероника Степанова сейчас
Вероника Юрьевна продолжает делать обзоры на важные, порой неудобные темы. Среди ее работ — объяснение, что такое иерусалимский синдром, взгляд на детские и взрослые страхи, причины агрессии и бессонницы, способы преодоления обид и обвинения любимого певца Майкла Джексона в педофилии. Также функционирует ее сайт, где каждый нуждающийся в психологической помощи может обратиться к профессионалу и избавиться от проблем.
Вероника Степанова в 2019 годуПри этом женщина охотно соглашается на тет-а-теты с коллегами. Например, в декабре 2018-го состоялась встреча с молодым эпатажным блогером Андреем Петровым. Чуть позднее, накануне Дня Победы – 2019 парень записал видео, где рассказал, что он относится к Степановой как к шоумену, и признался, что обижен, что в качестве примера человека со звездной болезнью она в своем выпуске упомянула именно его.
Кстати, мнение по поводу ее деятельности разошлись: одни не устают благодарить за вовремя данный мудрый совет, а другие рвут и мечут, называя обыкновенной аферисткой с ценами за услуги, которые даже Вольф Мессинг бы себе не позволил.
Библиография
- 2017 – «Психология без запретов! Сумасшедшие темы. Честные ответы»
Soundstream: Вероника Степанова — слушать плейлист с аудиоподкастами онлайн
Описание
Здесь вы найдете профессионально аналитичные, откровенные и глубокие видео на самые различные психологические темы: Патопсихология, неврозы, конфликты, секс и многое другое! Мои видео выходят каждый понедельник и четверг в 16.00 по Московскому времени!
172 эпизода
сначала новыесначала старые
мой сайт https://veronikastepanova.
com/
запись на консультацию через соц.сети :
инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/
вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/
запись на консультацию через соц.сети :
инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/
вконтакте https://vk.com/idvero.
..
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/
запись на консультацию через соц.сети :
инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/
вконтакте https://vk.
com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/
запись на консультацию через соц.сети :
инстаграм https://www.
instagram.com/veronik20011/
вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
семинмой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/i…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/
запись на консультацию через соц.
сети :
инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/
вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/
запись на консультацию через соц.
сети :
инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/
вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
мой сайт https://veronikastepanova.com/ запись на консультацию через соц.сети : инстаграм https://www.instagram.com/veronik20011/ вконтакте https://vk.com/idvero…
Вероника Степанова: Важно научиться помогать себе самому
На канал Вероники Степановой в YouTube я наткнулась совершенно случайно.
Прежде всего меня привлекла красота этой женщины – она невероятно яркая, с интересными чертами лица. И еще мне понравились ее грамотная речь и хорошо поставленный голос. Во всем этом было какое-то магическое изящество. Второй момент – это темы ее роликов, каждый из которых занимал не более 15 минут, и при этом очень емко раскрывал важные проблемы. Как зрителя меня зацепила ее невероятная откровенность и умение называть вещи своими именами. На мой взгляд, в Веронике есть прекрасная и редкая черта – умение совмещать черный юмор с научным подходом. Получается так, что ты смеешься и в то же время понимаешь, что она говорит правильные и важные вещи. Поэтому мне захотелось пообщаться с ней лично. Представляю тебе интервью с психологом Вероникой Степановой, которая рассказала о работе в Интернете, о некоторых любопытных случаях из своей практики и о том, для чего нужно обращаться к психотерапевту.
О ТОМ, КАК НАЧАЛИСЬ ПСИХОЛОГИЧЕСКИЕ КОНСУЛЬТАЦИИ
Много лет я висела на шее у мужа, занимаясь психотерапией бесплатно, на правах волонтера.
Консультировала наркоманов, работала за какие-то копейки в клинике, в университете. Мне казалось тогда, что это шарлатанство – брать деньги с человека только за то, что я с ним побеседовала. Разумеется, я понимала, что нужно учиться продавать свои знания, но как? Что для этого нужно сделать? Изучив опыт некоторых своих коллег, я создала канал в YouTube, начала писать статьи, записывать видео и размещала все это в социальных сетях – в общем, воткнула себя всюду, куда только было возможно.
Пять лет назад мой муж потерпел крах из-за финансового кризиса, мы сидели без света с неоплаченными счетами, начался какой-то кошмар. Тогда я осознала, что должна начать зарабатывать сама, иначе мне просто нечем будет кормить ребенка. Это и стало важнейшим стимулом. Итак, я начала давать платные психологические консультации по Skype.
О РАБОТЕ В ИНТЕРНЕТЕ
Думаю, мой успех в Интернете связан с тем, что я никогда не уживалась в коллективах из-за какой-то экстремальной откровенности.
Люди не так уж часто называют вещи своими именами, в основном в рабочих коллективах общаются форматно, заурядно, правильно, не позволяют себе лишнего. Для меня это невыносимо. Теперь, работая исключительно онлайн, я поняла, что могу сказать все, что считаю важным, без оглядки на корпоративный этикет.
САМЫЕ РАСПРОСТРАНЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ КЛИЕНТОВ
Наиболее распространенные проблемы моих клиентов – это внутриличностные конфликты. Любопытно, что мужчины не хотят тратиться на решение этих проблем, за помощью обращаются в основном женщины, сегодня они составляют 90% моих клиентов. Я разделяю клиенток и пациенток, пациентки – это те, у кого есть какая-то патология, а клиентки – это люди, которые ищут решение какой-то проблемы. Большинство пациентов приходят ко мне с неврозами: страхи, депрессии, а если брать какую-то обычную социальную историю, то это межличностные отношения.
ИСТОРИИ ИЗ ПРАКТИКИ О ТОМ, КАК МЕНЯЕТСЯ ЖИЗНЬ ПОСЛЕ ТЕРАПИИ
Вспоминаются две любопытные истории из моей практики.
Первый случай был с человеком, который пришел ко мне в рваном свитере, а впоследствии стал очень богатым. Мы с ним проработали те страхи, с которыми он сталкивался. Он очень быстро стал набирать обороты и уже приходил ко мне, чтобы поделиться своими успехами. У него сформировался материнский перенос на меня, так как родная мать игнорировала его успехи и победы, что и привело к депрессии, а я его хвалила. Самое интересное, что ему этого было достаточно. Ему хватило года, чтобы достигнуть колоссальных результатов.
Второй случай – c девушкой. Она была замужем, но много лет не могла иметь детей. У бесплодия есть своя психосоматическая причина – конфликт, страх иметь детей. Одна часть ее личности боится, что грудь обвиснет, появятся растяжки, мужчинам она станет не нужна, а вторая задавала некий конфликт, который мешал полноценной репродуктивной функции. Мы взаимодействовали с той частью, которая мешала, они нашли общий язык, и девушка смогла родить ребенка.
КАК НАЙТИ СВОЕГО ПСИХОТЕРАПЕВТА
Найти своего специалиста очень непросто.
Я видела огромное количество психологов, психотерапевтов, но до сих пор не могу найти своего, хотя у меня их было очень много. Это так же трудно, как найти своего любимого человека, потому что общение с психотерапевтом подразумевает большую глубину и близость, чтобы быть действительно услышанной. Выбирать и рассматривать психотерапевта нужно по своему внутреннему комфорту. Разумеется, психолог должен вести себя в рамках врачебной этики.
ОБ ОПАСНЫХ ПСИХОЛОГИЧЕСКИХ ТРЕНИНГАХ
Колоссальный процент тренингов я просто закрыла бы, потому что там происходит самодурство, а в 80% случаев культивируется желание унизить, чтобы самоутвердиться. Ключевым моментом при выборе тренингов является внутренне состояние. Тело нас никогда не обманывает, оно чувствует, что его кто-то насилует, с ним делают что-то не то. Но в силу нашей трусости или воспитания мы иногда продолжаем оставаться в тех условиях, которые нас не устраивают. «Раз все сидят и хлопают в ладоши, то почему я, как белая ворона, должна встать и уйти».
Тренинги могут проходить в самых известных университетах, клиниках, их могут вести кандидаты медицинских наук, доктора, но это все не показатель. Единственный индикатор – это собственное самочувствие, не нравится – уходи.
О ВСЕОБЩЕЙ УВЛЕЧЕННОСТИ ЭЗОТЕРИКОЙ
Большой интерес к эзотерике можно связать с ассоциативным рядом, который всплывает в сознании людей: тепло, океан, яркая одежда, улыбающиеся лица, все красивое, без границ, всё можно. У людей, особенно советских, которые хорошо помнят время форматов, возникает тяга к чему-то теплому и расслабленному. Им нравится запах ароматических палочек, танцы, возникает ощущение беззаботности. Это связано с тем, что люди устали от повседневности.
ЧТО ДЕЛАТЬ, ЕСЛИ БЛИЗКИЙ ЧЕЛОВЕК ПОПАЛ В СЕКТУ
Иногда посещение тренингов заканчивается вербовкой в секту. Такие люди резко меняются и начинают склонять друзей и членов семьи следовать за ними. Если этот человек для тебя важен и близок, то имеет смысл поддаться на его уговоры, чтобы иметь возможность выстроить диалог, а не противостояние.
Это позволит лучше понять человека, порассуждать вместе с ним и, возможно, со временем спокойно объяснить, что секта – это совершенно не то, что ему нужно.
САМЫЕ СТРАННЫЕ СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ
Представь себе: человек живет в другой стране, он один, никто ему не помогает. При этом у него весьма необычное пристрастие – порнозависимость. Он не просто смотрит порно, а платит женщинам, которые делают всё, что он захочет, и демонстрируют ему это по Skype. В результате он не ест, не пьет, не выходит из дома, у него начинаются проблемы с работой, вскоре он оказывается чуть ли не на улице. При попытке оторваться от компьютера у него начинается психоз. Его эмоциональное состояние сравнимо с наркозависимостью, и он ничего не может с этим сделать.
ПРОБЛЕМЫ С МУЖЧИНАМИ
В последнее время девушки все чаще говорят о том, что невозможно выйти замуж, мужчин мало, и они правы. Их, действительно, очень мало. Более того, наши мужчины рождаются у созависимых женщин, они безумно избалованны, часто сами ничего собой не представляют, но требования к женщине выдвигают завышенные.
Я даже не знаю, какую рекомендацию дать в этом случае. Наверное, уехать жить за границу и выйти замуж за иностранца. Конечно, менталитет разный, но, когда подходишь к 30 годам без мужа, нужно рассматривать разные варианты.
КАК РАСПОЗНАТЬ ТЯЖЕЛЫЙ СЛУЧАЙ
Отличить человека, требующего госпитализации, от человека в депрессии можно по некоторым признакам. Депрессия, как мы знаем, начинается с апатии, которая затем усугубляется. Человек меняет свое поведение, перестает себя обслуживать, например не чистит зубы, не умывается, не ест, лежит, отвернувшись к стене. Это уже звоночек, что пора связываться с врачом и госпитализировать, иначе дело может кончиться печально. Пока ты справляешься со своим состоянием, ты в условной норме.
МОЖНО ЛИ ПОМОЧЬ СЕБЕ?
На самом деле пожизненная психотерапия никому не нужна, но есть определенный объем знаний, который необходим человеку, чтобы он научился быть психотерапевтом сам для себя.
Главная задача – обеспечить его тем инструментом, который он будет применять на себе. Человек будет знать, как поступить в той или иной ситуации. Если постоянно применять эти инструменты, то можно управлять своим состоянием и чувствовать себя хорошо.
Если тебе все же необходима помощь психолога, со мной можно связаться в любой из соцсетей:
Youtube
Вконтакте
Гений, психотерапевт, Вероника Степанова
Клинический психолог или, как нынче модно говорить, «психологиня» записывает ролики на YouTube по распространённым психологическим проблемам, расстройствам, отклонениям или просто интересующим людей темам. Без всякого стеснения Вероника рассказывает про различные патологии, негативные отзывы бывших клиентов и свою раннюю беременность, чем прославилась в интернете и за что ее полюбили зрители.
Вероника Степанова начала вести канал на YouTube в 2012 году, когда ее муж Николай прогорел с бизнесом. Тогда в светлую голову психолога пришла мысль монетизировать все имеющиеся у нее знания, ведь она проучилась половину своей жизни: психфак СПбГУ, НИПНИ им. В. Бехтерева, Portland State University в США, ТЕМЕНОС, РГПУ им. А. Герцена, фельдшерский колледж, фармтехникум и многое другое.
С Николаем они вместе со школьных лет, сейчас им слегка за сорок. Свою старшую дочь Александру Вероника родила в шестнадцать. Как неоднократно признается психологиня в своих видео, старшим ребенком она занималась мало. Учеба, гулянки, молодой брак – не до этого. Александра выросла талантливой и самостоятельной девушкой, еще школьницей уехала в США, в мае 2019-го окончила Орегонский университет, сейчас строит карьеру и, как мама, ведет блог на YouTube. Сейчас Вероника живет в Мексике с мужем Николаем и младшей дочерью Серафимой.
На канале психолога больше миллиона подписчиков.
Если понаблюдать за развитием канала, можно заметить, что Вероника выросла профессионально и в плане блогинга. Чистый фон, качественная картинка благодаря проф-оборудованию, звук без шумов. На первых видео плохой звук и фон, но, как говорится, любим мы ее не за это. Она зацепила зрителей своей искренностью и отсутствием комплексов. Вероника не стесняется приводить примеры из своей личной жизни. Какой бы темы она не коснулась, ей всегда есть, чем подкрепить теоретическую базу. С детства Веронике были интересны различные патологии, нравилось наблюдать за «не такими, как все». Сама Вероника, по ее словам, невротик с нотками нарциссизма.
На канале клинического психолога есть постоянные рубрики: «Психологический разбор фильмов и звезд», «Ответы на ваши вопросы», «Любовь и отношения» и т.д. Каково же их содержание?
Психологический разбор фильмов и звезд. Вероника делает не просто рецензии на фильмы, она расщепляет фильм на крупицы и расписывает каждый кусочек с точки зрения психологии.
Рассматривает героев фильма каждого в отдельности, ставит им диагнозы, исходя из симптомов, которые есть у каждого. На примере популярных людей и героев известных фильмов психолог рассказывает, как протекает то или иное психическое расстройство или как переживать психотравму.
Ответы на ваши вопросы. На каждый ролик Вероника отбирает несколько наиболее интересных вопросов подписчиков. Приводит примеры из опыта с пациентами, из своей жизни, своих друзей, родителей. У нее нет запретных тем.
Любовь и отношения. Психолог призывает помнить, что любая ситуация, в которой человек оказался, была создана им же. И что не все люди мыслят так же, как и ты. Во взаимоотношениях с людьми важно понимать и осознавать это.
У Вероники Степановой есть сайт, где каждый нуждающийся в психологической помощи может обратиться к профессионалу и избавиться от проблем. Консультации она ведет исключительно по Skype, к ней могут обратиться русскоговорящие люди из любой точки мира. Однако цены на ее услуги отнюдь не доступные.
Она объясняет это тем, что так уменьшается поток желающих записаться, и она может себе позволить брать по две-три консультации в день. Но спрос, несмотря на ценник, не падает.
Мнения по поводу ее деятельности расходятся: одни бесконечно благодарны за ее вклад в массовую психологию, ведь даже не посещая консультацию, а просто посмотрев нужное видео, человек может получить помощь. Другие считают ее аферисткой и строчат ей кучи негативных комментариев. Но, как Вероника говорит в одном из своих видео, она на них не обижается: пиар есть пиар.
Ангелина ГРИГОРЯН
Фото из Instagram Вероники Степановой
Вероника Степанова прекрасна
Вероника Степанова прекраснаНастало время баянистого трэш контента.
{ «author_name»: «Toxic No1Livz4ever», «author_type»: «self», «tags»: [«nolftrash»], «comments»: 4, «likes»: 7, «favorites»: 0, «is_advertisement»: false, «subsite_label»: «unknown», «id»: 167512, «is_wide»: true, «is_ugc»: true, «date»: «Wed, 08 Jul 2020 21:31:55 +0300», «is_special»: false }
{«id»:48798,»url»:»https:\/\/dtf.
ru\/u\/48798-toxic-no1livz4ever»,»name»:»Toxic No1Livz4ever»,»avatar»:»a25fca17-814c-581a-b075-7b868edc9e68″,»karma»:20817,»description»:»\»\u0411\u043b\u043e\u0433\» \u0441 \u043a\u0430\u043a\u043e\u0439-\u0442\u043e \u0440\u0430\u043d\u0434\u043e\u043c\u043d\u043e\u0439 \u0445\u0435\u0440\u043d\u0435\u0439. RAWG PSN: No1livz4everr»,»isMe»:false,»isPlus»:true,»isVerified»:false,»isSubscribed»:false,»isNotificationsEnabled»:false,»isShowMessengerButton»:false}
{«url»:»https:\/\/booster.osnova.io\/a\/relevant?site=dtf»,»place»:»entry»,»site»:»dtf»,»settings»:{«modes»:{«externalLink»:{«buttonLabels»:[«\u0423\u0437\u043d\u0430\u0442\u044c»,»\u0427\u0438\u0442\u0430\u0442\u044c»,»\u041d\u0430\u0447\u0430\u0442\u044c»,»\u0417\u0430\u043a\u0430\u0437\u0430\u0442\u044c»,»\u041a\u0443\u043f\u0438\u0442\u044c»,»\u041f\u043e\u043b\u0443\u0447\u0438\u0442\u044c»,»\u0421\u043a\u0430\u0447\u0430\u0442\u044c»,»\u041f\u0435\u0440\u0435\u0439\u0442\u0438″]}},»deviceList»:{«desktop»:»\u0414\u0435\u0441\u043a\u0442\u043e\u043f»,»smartphone»:»\u0421\u043c\u0430\u0440\u0442\u0444\u043e\u043d\u044b»,»tablet»:»\u041f\u043b\u0430\u043d\u0448\u0435\u0442\u044b»}},»isModerator»:false}
Еженедельная рассылка
Одно письмо с лучшим за неделю
Проверьте почту
Отправили письмо для подтверждения
[ { «id»: 1, «label»: «100%×150_Branding_desktop», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop» ], «adfox_method»: «createAdaptive», «auto_reload»: true, «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «ezfl» } } }, { «id»: 2, «label»: «1200х400», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «phone» ], «auto_reload»: true, «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «ezfn» } } }, { «id»: 3, «label»: «240х200 _ТГБ_desktop», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «fizc» } } }, { «id»: 4, «label»: «Article Branding», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «p1»: «cfovz», «p2»: «glug» } } }, { «id»: 5, «label»: «300x500_desktop», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «ezfk» } } }, { «id»: 6, «label»: «1180х250_Interpool_баннер над комментариями_Desktop», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «h», «ps»: «clmf», «p2»: «ffyh» } } }, { «id»: 7, «label»: «Article Footer 100%_desktop_mobile», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «tablet», «phone» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «p1»: «bwral», «p2»: «fjxb» } } }, { «id»: 8, «label»: «Fullscreen Desktop», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop», «tablet» ], «auto_reload»: true, «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «fjoh» } } }, { «id»: 9, «label»: «Fullscreen Mobile», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «phone» ], «auto_reload»: true, «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «fjog» } } }, { «id»: 10, «disable»: true, «label»: «Native Partner Desktop», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop», «tablet» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «fmyb» } } }, { «id»: 11, «disable»: true, «label»: «Native Partner Mobile», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «phone» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «fmyc» } } }, { «id»: 12, «label»: «Кнопка в шапке», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop», «tablet» ], «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «g», «ps»: «clmf», «p2»: «fdhx» } } }, { «id»: 13, «label»: «DM InPage Video PartnerCode», «provider»: «adfox», «adaptive»: [ «desktop», «tablet», «phone» ], «adfox_method»: «createAdaptive», «adfox»: { «ownerId»: 228129, «params»: { «pp»: «h», «ps»: «clmf», «p2»: «flvn» } } }, { «id»: 14, «label»: «Yandex context video banner», «provider»: «yandex», «yandex»: { «block_id»: «VI-250597-0», «render_to»: «inpage_VI-250597-0-1134314964», «adfox_url»: «//ads.
adfox.ru/228129/getCode?pp=h&ps=clmf&p2=fpjw&puid1=&puid2=&puid3=&puid4=&puid8=&puid9=&puid10=&puid21=&puid22=&puid31=&puid32=&puid33=&fmt=1&dl={REFERER}&pr=»
}
},
{
«id»: 15,
«label»: «Баннер в ленте на главной»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«desktop»,
«tablet»,
«phone»
],
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«p1»: «byudo»,
«p2»: «ftjf»
}
}
},
{
«id»: 16,
«label»: «Кнопка в шапке мобайл»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«tablet»,
«phone»
],
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«p1»: «chvjx»,
«p2»: «ftwx»
}
}
},
{
«id»: 17,
«label»: «Stratum Desktop»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«desktop»
],
«auto_reload»: true,
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«pp»: «g»,
«ps»: «clmf»,
«p2»: «fzvb»
}
}
},
{
«id»: 18,
«label»: «Stratum Mobile»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«tablet»,
«phone»
],
«auto_reload»: true,
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«pp»: «g»,
«ps»: «clmf»,
«p2»: «fzvc»
}
}
},
{
«id»: 19,
«label»: «Тизер на главной 2»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«desktop»,
«tablet»,
«phone»
],
«auto_reload»: true,
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«p1»: «cmtwg»,
«p2»: «gazs»
}
}
},
{
«id»: 20,
«label»: «Кнопка в сайдбаре»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«desktop»
],
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«p1»: «chfbl»,
«p2»: «gnwc»
}
}
},
{
«id»: 21,
«label»: «Ультратизер»,
«provider»: «adfox»,
«adaptive»: [
«desktop»
],
«adfox»: {
«ownerId»: 228129,
«params»: {
«pp»: «g»,
«ps»: «clmf»,
«p2»: «gtjk»
}
}
}
]
{«token»:»eyJhbGciOiJIUzI1NiIsInR5cCI6IkpXVCJ9.
eyJwcm9qZWN0SWQiOiI1ZTRmZjUyNjYyOGE2Yzc4NDQxNWY0ZGMiLCJpYXQiOjE1ODI1MzY0Nzd9.BFsYFBgalfu_3oH9Fj-oBhiEgVx976VQfprRahAELFQ»,»release»:»59e44e91″}{ «jsPath»: «/static/build/dtf.ru/specials/DeliveryCheats/js/all.min.js?v=05.02.2020», «cssPath»: «/static/build/dtf.ru/specials/DeliveryCheats/styles/all.min.css?v=05.02.2020», «fontsPath»: «https://fonts.googleapis.com/css?family=Roboto+Mono:400,700,700i&subset=cyrillic» }
nullВероника Степанова, все книги автора: 2 книги
Вероника Степанова, все книги автора: 2 книги — скачать в fb2, txt на андроид или читать онлайнВероника Степанова
Статистика по творчеству автора Вероника Степанова
| Серия | Книг | Популярность |
|---|---|---|
| #Psychology#Know-How | 2 | % |
| Год | Книг | Активность |
|---|---|---|
| 2017 | 2 | % |
Переключить стиль отображения :
Психология без запретов! Сумасшедшие темы.
Честные ответы
Вероника Степанова
Общая психология
#Psychology#Know-How
Как часто вам казалось, что вы сошли с ума, а вокруг все такие нормальные и хорошие люди? Или наоборот, что делать, когда вокруг люди с кучей «тараканов» в голове? Как не попасть в множество ловушек, которые подсовывает жизнь? В этой книге собраны не только самые острые и «запретные» для большинст…
Аудиокнига
Психология без запретов! Сумасшедшие темы. Честные ответы
Вероника Степанова
Общая психология
#Psychology#Know-How
Психология – увлекательная штука, которая порой напоминает захватывающий детективный роман. Вероника Степанова распутывает сложный клубок человеческих взаимоотношений. Как часто вам казалось, что вы сошли с ума, а вокруг все такие нормальные и хорошие люди? Или наоборот, что делать, когда вокруг…
01
Информация для авторов и правообладателей
2017, Скачайте книги на http://bookash.
pro/ или читайте онлайн.
, личная жизнь. Литературные произведения Вероники как психолога
Вероника Степанова — высококвалифицированный специалист, психолог с огромным опытом работы, которая сейчас очень популярна. При этом ее биография на посторонних ресурсах не слишком тиражируется, поэтому наша статья будет основана непосредственно на словах психолога, а также на информации с официальных страниц в социальных сетях.
Биография
Степанова Вероника Юрьева опубликована 14 августа 1978 года.Сегодня работает клиническим психологом в ФГБУ Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт им. В.М. Бехтерева.
Вероника Степанова училась в Санкт-Петербургском государственном университете на факультете психологии, на кафедре медицинской психологии и психофизиологии, где получила законченное высшее образование.
Кроме того, она окончила еще два учебных заведения, последнее из которых находится в Америке.
Это подтверждает высокую квалификацию, за которую Вероника Степанова собирает отзывы с добрыми пожеланиями и благодарностями.Среднее образование девочка получила в школе №77 города Санкт-Петербурга. Там она проучилась полных 11 классов.
Семья
Психолог Вероника Степанова предпочитает не распространять информацию о своем супруге. Однако известно, что он есть. К сожалению, ни одному источнику в Интернете не удается узнать, за кого вышла замуж Вероника Степанова. При этом личная жизнь полностью не скрывается: известно, что у женщины две дочери.
Старшая, сегодня в 2016 году, живет в Америке и активно поддерживает деятельность своей матери, снимая обзорные видеоролики о ее открытых уроках и обсуждениях.Интернет-звезда практически не расстается с младшей дочерью. На личных страницах в социальных сетях можно увидеть множество их совместных фото из разных уголков мира, на которых они проводят личное время с семьей по выходным.
Активности на YouTube
Личный блог ведет не только старшая дочь, но и сама Вероника Степанова.
Психолог делится с людьми профессиональными знаниями, дает советы, обсуждает на своем канале основные проблемы общества и, конечно же, психические заболевания, их тонкости и особенности.
Канал уже собрал более 50 тысяч поклонников, которые следят за ее творчеством и работой, а некоторые ролики собирают более 200 тысяч просмотров. Вероника Степанова старается регулярно читать отзывы под этими роликами, также она проводит консультации в скайпе и по возможности старается отвечать потенциальным пациентам в личных сообщениях.
Канал Вероники Степановой был создан 23 августа 2012 года, хотя начал свою деятельность гораздо позже — 3 года назад. Общее количество просмотров за 2016 год — 7 с половиной миллионов!
Этот ресурс содержит много уникальной информации, часть которой невозможно «получить» из сторонних ресурсов.Обсуждая тему, он делает это с таким профессионализмом, что у публики создается впечатление, что в данный момент они лично с ней консультируются.
Говоря о различных диагнозах, Вероника Степанова всегда высказывает собственное мнение и окольными путями успокаивает публику в том случае, если они вдруг от этого страдают. Видео также часто носят юмористический характер, где психолог корчит рожи, поет песни с любимой дочерью и тому подобное. Это служит своего рода отдыхом между серьезными темами, которые она также часто раскрывает в легких сообщениях.
Нецензурная лексика
Некоторые считают неправильным специфический подход этой женщины, но с помощью смелых заявлений и смелых слов психологу удается привлечь внимание молодежи.
Некоторые приходят на ее канал просто посмеяться, расслабиться, в процессе чего невольно узнают новую, полезную информацию о людях, их характере и психических заболеваниях.
Вероника Степановача чаще всего затрагивает тему секса и все вопросы, возникающие в связи с этим.Психолог делает такой смелый шаг достойно, не позволяя себе лишнего, и, несмотря на ненормативную лексику, никогда не оскорбляет людей ни какими психологическими отклонениями.
Можно сказать, что даже наоборот: она с некоторым уважением относится к душевнобольным и пытается объяснить себя доступным языком.
Сексуальные предпочтения
Эта тема может показаться сложной, но на самом деле многие заинтересованы в ответах на такие вопросы. Посмотрев видеоблог Степановой, можно сделать логический вывод, что ей нравятся мужчины с необычными наклонностями.
Дело в том, что психолог сама не раз повторяла и не стесняется напоминать об этом: парней и мужчин в женской одежде, с миловидными привычками или с любовью переодеваться в одежду неправильного пола, ее привлекает ранняя молодость.
Благодаря тому, что женщина не скрывает столь пошлого факта (по мнению большинства жителей России), ее слова не вызывают безоглядного желания осудить незнакомых людей. Таким образом, психологу удается вселить доверие в ее зрителях, потому что она полностью открыта для них, даже когда дело доходит до того, что не обязательно должно быть выставлено на всеобщее обозрение.
Черты характера
О личных качествах Вероники Степановой можно сказать много, и все они положительные со стороны. Прежде всего, он открытый человек, без каких-либо комплексов и убеждений, навязываемых обществом.
У этого человека жесткий, властный характер, он не прощает обид или просто не принимает их. Это качество позволяет ей быть максимально профессиональным в своих утверждениях, выводах и даже в простом общении с людьми, которые нуждаются в ее помощи.
Психолог всегда конкретен в своих словах и никогда не отказывается от них, что позволяет удобно смотреть ее видеоблог, потому что это дает ему структурированность, надежность и последовательность. Касаясь общей темы, Вероника Степанова всегда говорит о прилегающих к ней ветвях, и с этой помощью ее зрители всегда могут найти именно ту информацию, которая им интересна в данный момент.
Хотя в высказываниях сотрудника медицинского учреждения часто можно услышать совершенно неприемлемые вещи, связанные с фекалиями, нецензурными шутками и всем, что есть поблизости, любители творчества не воспринимают это как нечто серьезное.
С помощью этой функции зрителям удается от души посмеяться и максимально расслабиться, даже если основная познавательная нагрузка посвящена именно их проблемам.
Подведем итоги
Современные и юмористические подходы даже к таким серьезным вещам, как психиатрия и психофизиология, иногда могут принести пользу только в том случае, если человек действительно знает, как использовать эти методы.
Вероника Степанова — единственный психолог, умеющий с достаточным профессионализмом и качеством использовать инновации в молодежной среде.
Вероника Степанова — высококвалифицированный специалист, психолог с огромным опытом работы, которая сейчас очень популярна. При этом ее биография на посторонних ресурсах не слишком тиражируется, поэтому наша статья будет основана непосредственно на словах психолога, а также на информации с официальных страниц в социальных сетях.
Биография
Степанова Вероника Юрьева опубликована 14 августа 1978 года. Сегодня она работает клиническим психологом в ФГБУ «Санкт-Петербург».
Петербургский научно-исследовательский и опытно-конструкторский институт имени В. М. Бехтерева.
Вероника Степанова училась в Санкт-Петербургском государственном университете на факультете психологии, на кафедре медицинской психологии и психофизиологии, где получила законченное высшее образование.
Кроме того, она окончила еще два учебных заведения, последнее из которых находится в Америке. Это подтверждает высокую квалификацию, за которую Вероника Степанова собирает отзывы с добрыми пожеланиями и благодарностями.Среднее образование девочка получила в школе №77 города Санкт-Петербурга. Там она проучилась полных 11 классов.
Семья
Психолог Вероника Степанова предпочитает не распространять информацию о своем супруге. Однако известно, что он есть. К сожалению, ни одному источнику в Интернете не удается узнать, за кого вышла замуж Вероника Степанова. При этом личная жизнь полностью не скрывается: известно, что у женщины две дочери.
Старшая, Александра Степанова, в настоящее время живет в Америке в 2016 году и активно поддерживает деятельность матери, снимая обзорные видеоролики о ее открытых уроках и обсуждениях.
Интернет-звезда практически не расстается с младшей дочерью. На личных страницах в социальных сетях можно увидеть множество их совместных фото из разных уголков мира, на которых они проводят личное время с семьей по выходным.
Активности на YouTube
Личный блог ведет не только старшая дочь, но и сама Вероника Степанова. Психолог делится с людьми профессиональными знаниями, дает советы, обсуждает на своем канале основные проблемы общества и, конечно же, психические заболевания, их тонкости и особенности.
Канал уже собрал более 50 тысяч поклонников, которые следят за ее творчеством и работой, а некоторые ролики собирают более 200 тысяч просмотров. Вероника Степанова старается регулярно читать отзывы под этими роликами, также она проводит консультации в скайпе и по возможности старается отвечать потенциальным пациентам в личных сообщениях.
Канал Вероники Степановой был создан 23 августа 2012 года, хотя начал свою деятельность гораздо позже — 3 года назад.
Общее количество просмотров за 2016 год — 7 с половиной миллионов!
Этот ресурс содержит много уникальной информации, часть которой невозможно «получить» из сторонних ресурсов.Обсуждая тему, медицинский психолог делает это с таким профессионализмом, что у аудитории создается впечатление, что они лично консультируются с ней в данный момент.
Говоря о различных диагнозах, Вероника Степанова всегда высказывает собственное мнение и окольными путями успокаивает публику в том случае, если они вдруг от этого страдают. Видео также часто носят юмористический характер, где психолог корчит рожи, поет песни с любимой дочерью и тому подобное. Это служит своего рода отдыхом между серьезными темами, которые она также часто раскрывает в легких сообщениях.
Нецензурная лексика
Некоторые считают неправильным специфический подход этой женщины, но с помощью смелых заявлений и смелых слов психологу удается привлечь внимание молодежи.
Некоторые приходят на ее канал просто посмеяться, расслабиться, в процессе чего невольно узнают новую, полезную информацию о людях, их характере и психических заболеваниях.
Вероника Степановча чаще всего затрагивает тему секса и все вопросы, возникающие в связи с этим.Психолог делает такой смелый шаг достойно, не позволяя себе лишнего, и, несмотря на ненормативную лексику, никогда не оскорбляет людей ни какими психологическими отклонениями. Можно сказать, что даже наоборот: она с некоторым уважением относится к душевнобольным и пытается объяснить себя доступным языком.
Сексуальные предпочтения
Эта тема может показаться сложной, но на самом деле многие заинтересованы в ответах на такие вопросы. Посмотрев видеоблог Степановой, можно сделать логический вывод, что ей нравятся мужчины с необычными наклонностями.
Дело в том, что психолог сама не раз повторяла и не стесняется напоминать об этом: парней и мужчин в женской одежде, с миловидными привычками или с любовью переодеваться в одежду неправильного пола, ее привлекает ранняя молодость.
В связи с тем, что женщина не скрывает столь пошлого факта (по мнению большинства жителей России), ее слова не вызывают безоглядного желания осуждать чужие личные предпочтения.
Таким образом, психологу удается вызвать доверие у своих зрителей, потому что она полностью им открыта, даже если речь идет о чем-то, что не обязательно должно быть выставлено на всеобщее обозрение.
Черты характера
О личных качествах Вероники Степановой можно сказать много, и все они положительные со стороны. Прежде всего, он открытый человек, без каких-либо комплексов и убеждений, навязываемых обществом.
У этого человека жесткий, властный характер, он не прощает обид или просто не принимает их. Это качество позволяет ей быть максимально профессиональным в своих утверждениях, выводах и даже в простом общении с людьми, которые нуждаются в ее помощи.
Психолог всегда конкретен в своих словах и никогда не отказывается от них, что позволяет удобно смотреть ее видеоблог, потому что это дает ему структурированность, надежность и последовательность. Касаясь общей темы, Вероника Степанова всегда говорит о прилегающих к ней ветвях, и с этой помощью ее зрители всегда могут найти именно ту информацию, которая им интересна в данный момент.
Хотя в высказываниях сотрудника медицинского учреждения часто можно услышать совершенно неприемлемые вещи, связанные с фекалиями, нецензурными шутками и всем, что есть поблизости, любители творчества не воспринимают это как нечто серьезное.С помощью этой функции зрителям удается от души посмеяться и максимально расслабиться, даже если основная познавательная нагрузка посвящена именно их проблемам.
Подведем итоги
Современные и юмористические подходы даже к таким серьезным вещам, как психиатрия и психофизиология, иногда могут принести пользу только в том случае, если человек действительно знает, как использовать эти методы.
Вероника Степанова — единственный психолог, умеющий с достаточным профессионализмом и качеством использовать инновации в молодежной среде.
Сегодня огромное количество людей сталкивается с определенными трудностями в личной жизни, многие не знают, как вызвать интерес у представителей противоположного пола или правильно построить гармоничные отношения с избранником или избранницей.
В ролике опытный специалист в области психологии и сексологии Вероника Степанова дает интересные и полезные рекомендации девушкам и женщинам, которые стоит посмотреть всем, кто хочет укрепить существующую пару или создать новую.Представленная в ролике хорошенькая дама обещает рассказать о том, каких женщин действительно выбирают мужчины, что нужно сделать женщине, чтобы стать по-настоящему интересной и очаровательной. По словам Вероники, понятия выбора и обычного сочувствия существенно различаются, и девушки должны это знать.
Психолог подчеркивает, что у каждого человека есть внутреннее, подсознательное представление о том, каким должен быть спутник жизни. Степанова утверждает, что искусственное изменение природных данных — серьезная ошибка.После просмотра ролика многие женщины обязательно сделают для себя важные выводы и постараются избавиться от неправильного отношения в сфере человеческих отношений. Смотрите видео «Вероника Степанова, психология» в хорошем качестве 720 HD.
Все материалы за 2017 и 2018 годы размещены на Youtube.com и доступны на нашем сайте без регистрации.
Многие до сих пор уверены, что к психологам приходят психологи или слабаки. Ну а если вы уже пошли к специалисту, то это нужно скрыть от всех — не дай бог, кто узнает, потом не помоется.Хотя в чем дело? Ведь учитель музыки не чинит обувь самостоятельно, космонавт не вырывает зуб, а повар не управляет государством. Но даже те, кто консультируется с психологами, часто не спрашивают обо всем, что их действительно волнует.
Есть условная вершина проблем, с которыми люди обращаются к психологам.
— Проблемы во взаимоотношениях … Если мужчины нет, то это проблема; если есть мужчина, это тоже проблема.
— Проблемы с детьми … Они либо вообще ничего не хотят, либо хотят неправильного, либо бунтуют. Неправильно, одним словом, дети.
— Проблемы с родителями … Либо не получишь помощи, то тыкают нос в свои дела, взаимопонимания нет.
— Проблемы с коллегами и друзьями … Постоянно пользуюсь, эта игра уже вылезла с одной целью, а на работе интригуют, просто успевают выйти.
— Душевное равновесие, стабильность и успех … Неуверенность в себе, неспособность выстроить свои границы, страдание от вечной роли хорошего мальчика или девочки.
По моему опыту, на самом деле есть еще много интересных «неудобных» вопросов. От СССР уже нет и следа, а секса вроде все равно нет. В лучшем случае эти вопросы обсуждаются с подругой на кухне или в бане с мужчинами за кружкой пива. Никто, конечно, не навязывает пожизненную психотерапию.Основная задача психолога — предоставить клиенту необходимые знания и инструменты для решения жизненных проблем. Человек должен знать, как справиться с той или иной ситуацией и что именно делать. Если постоянно пользоваться этими средствами, можно научиться управлять своим состоянием и чувствовать себя хорошо.
Психология вообще очень увлекательная вещь, иногда напоминающая увлекательный детектив.
С одной стороны, психологи легко справляются со многими проблемами, а в некоторых вопросах разобраться может даже неспециалист, с другой — не все так просто, как кажется: то, что на первый взгляд кажется однозначным, имеет такие глубокие корни, и что перед ними достать, нужно раскрутить клубок проблемной катушки за катушкой.
Возьмем, к примеру, модную сейчас самооманию с размещением фотографий в социальных сетях. «Посмотри, какая я красивая, какая я кукла!» — «кричит» девушка с фотографии. Но с кем она разговаривает? Для всего человечества? Нет, конечно, ей очень нужно, чтобы он ее увидел, это он смотрел на нее с восхищением. Если «повернуть» еще немного и спросить девушку, напоминает ли ей этот «он» кого-то, то в некоторых случаях оказывается, что именно этот человек очень напоминает ей ее отца.
И именно от отца она в первую очередь ожидает этих слов любви и признания, что она самая-самая девушка на свете! Именно этих слов она ни разу не дождалась в детстве. А вы говорите — чушь и прихоть .
..
Или другой пример. Как вы думаете, кто такие нудисты? Извращенцы или борцы за свободу? Я почти уверен, что твоя первая реакция чертовски отвратительна! Нудистские пляжи редко располагаются в глухой пустыне, почти всегда рядом с главным пляжем.А проходящие мимо отдыхающие праведно возмущаются, мол, какой позор! И все как один повторяют фразу: «Ну, были бы красивые тела, Бельведер Аполлон, но нет, в основном крестьяне от 45 лет и старше!» Однако и здесь не все так просто и однозначно. В этом сообществе условно можно выделить четыре категории: 1 — натуралисты-нудисты, 2 — извращенцы-эксгибиционисты, 3 — примкнувшие к «натуралистам» люди в купальниках и плавках, 4 — те, кто гуляет в этом месте снова и снова.
У первых несколько мотивов. Это, прежде всего, своего рода бравада, бунт подростка: «Трусы — социальные оковы, и я обязательно их сломаю». С другой стороны, это заявление миру о доверии, открытости: «Я был первым, кто сказал вам это, я открылся, теперь вы не можете причинить мне вред».
Ну и, собственно говоря, приглашение к атаке, провокация конфликта, чтобы окончательно избавиться от какого-то давнего конфликта, который так и не разрешился в один момент.
С извращенцами (сексуальными извращенцами) все печально, даже натуралисты страдают от них.Прыгать из кустов с возбужденным пенисом наперевес и напугать ребенка или, например, шокировать девочку-подростка — это их стиль, слишком велика потребность самоутвердиться.
«Те, кто присоединился», похоже, тоже открыто не заявляют о конфликте, но сообщение о неудовлетворенности своей позицией здесь очевидно.
А четвертые — кормильцы собственного расширенного эго: «Я такая красивая и высокоморальная, а вот такая газировка с гоморрой!»
И последний, самый простой и, пожалуй, распространенный пример.Какие эмоции вызывают у вас ленивые? Или что вы говорите о себе, когда вам откровенно лень что-то делать? Первое, что приходит в голову, — это ассоциации со слабостью, безответственностью, безразличием и прочими не самыми лестными эпитетами.
Но, что удивительно, за ленью скрывается страх. Страх неудачи, страх неодобрения, страх снова оказаться в роли безвольного послушного человека, неспособного сказать «нет» и т. Д. Между прочим, прокрастинация имеет те же корни — страх, страх и еще больше страха.
Что делать со своими тараканами
Меньше пафоса. Не поддавайтесь проблемам!
А теперь признайтесь себе: часто ли вам казалось, что вы сошли с ума и пора лечиться в специальном учреждении? Вроде бы все такие нормальные и хорошие люди, в голове нет тараканов, только я не справляюсь со своим «стадом». Что я должен делать?
Во-первых, чтобы успокоиться, поскольку люди, действительно страдающие органическими психическими расстройствами, ни в чем не признаются в этом, они считают себя более нормальными, чем все остальные.Во-вторых, почитайте рассказы некоторых известных людей. Здесь нужно лечиться, лечить и лечить снова. Однако это не помешало им стать великими. Мария Каллас страдала булимией, Горький, Комиссаржевская, Цвейг, Чаадаев и Шуберт — депрессией, Бехтерев был неврастеником.
Я не буду утомлять вас теорией стресса и историями о Гансе Селье, придумавшем этот термин, но мы должны признать, что мы действительно живем в стрессовое время, когда особенно важно сохранить себя, свои границы и научиться помогать себе.Конечно, работать с психологом — это здорово, грамотно и разумно, но и в роли вечного пациента не стоит зацикливаться. Есть много упражнений и техник, которые вы можете использовать самостоятельно. Просто повернитесь лицом к своей проблеме, не прячьтесь от нее и задайте себе вопрос «и что?» Чаще.
Рассмотрим хотя бы пресловутую зону комфорта, о которой все вокруг утверждают, что чуть ли не единственный способ добиться чего-то в жизни — это выйти из зоны комфорта.Зачем это тебе лично? Например, кто-то сломал вам челюсть в темном переулке. Вы обязательно выйдете из своей зоны комфорта. Но почему? Или, допустим, вы попали на тренинг, но оказалось, что в целом весь тренинг задумывался только для самоутверждения лидера. Вам нужно продолжать быть рядом и прислушиваться к словам унижения? Вряд ли, если, конечно, вы не готовитесь к какой-то особой миссии.
Или, например, вы продолжаете работать, что вам не нравится.Вот уже год в голове мелькают мысли, мол, найду новую классную работу, но на самом деле даже не пытались искать вакансии. И здесь выход из зоны комфорта необходим, приходится работать со своими страхами и второстепенными выгодами. И вот вы снова на тренинге или консультации, или читаете статью, которая действительно «сработала», и вдруг вы вдруг поняли в себе что-то, что вам не очень понравилось. Да, больно, но вот ответ на вопрос «ну и что?» Прекрасно видно: осознанность поможет продвигаться по жизни или хотя бы просто сделает ее проще и свободнее.
Чем меньше пафоса в оценке проблемы, тем легче. Не усложняйте себе жизнь, со многими вещами справиться очень легко. Прочитав книгу, вы поймете, почему я так уверенно говорю об этом. Выявление проблемы, признание для себя ее существования — это уже половина решения, и я расскажу, как с ними справиться.
За годы практики я столкнулся с множеством интересных историй и вопросов.
Как сказал Кант, «нет ничего интереснее в мире, чем звезды на небе и всякие странности внутри человеческого мозга.«Мы разберемся с этими странностями. И долой« неудобных »вопросов!
Chapter 1
Не для слабонервных! Как не попасть в психологическое рабство?
В этой главе вы узнаете:
— о неадекватной любви, любви к проблемному мужчине и возможно ли исправить бабника;
— о любви и зависимостях, а также о том, как к вам относятся;
— о том, как удачно выйти замуж, как правильно вести себя с иностранцем и что разница в возрасте делает с людьми;
— как найти компромисс с любым мужчиной и не раствориться в отношениях;
— как поставить на место манипуляторов, будь то энергетический вампир или специалист отдела кадров.
«Нет человека, который сам по себе был бы подобен Острову, каждый человек — это часть материка, часть суши …» — писал Джон Донн в 16 веке. За несколько веков ничего не изменилось.
Разве что общество стало «давить» сильнее. Обилие контактов, поток информации, насыщенность графика жизни порой заставляют мечтать о том, как мы захлопнем дверь в своем сердце и со словами «пусть горит синим пламенем» мы устремимся на необитаемый остров. .Но на самом деле? Можем ли мы себе это позволить? Нет, мы хорошие мальчики и девочки и всегда говорим «да». Ну что же тогда делать с этой «роскошью человеческого общения»?
Важно понимать, что семья, а также другие отношения — это бесконечный торг, постоянное обсуждение собственных границ и границ партнера. Ищите компромиссы: сначала свой футбол, то мое порно, и спящие дети будут получать мультфильмы утром. Проанализируйте рабочие ситуации, которые вам не подходят, подумайте, не спровоцируете ли вы сами своей виноватой внешностью начальника сесть вам на шею и свесить ноги, принять вашу жертву.Однако всегда есть выбор, решать — настаивать на своем или уступить. Есть разные способы сохранить внутренний баланс и соблюдать границы.
1. Отвечайте на запрос или предложение отказом, скажите «нет». Подруга просит одолжить ей денег? Скажите, о чем вам нужно подумать, чтобы выиграть время, и ее просьба не застает вас врасплох.
2. Торгуйтесь и договаривайтесь. В некоторых случаях вы пошли на уступку, но в других случаях вы получите фору.
3. Ограничьте посещения друзей.Нет-нет, не общение, просто встреча на нейтральной территории.
4. Есть люди, которых мы склонны демонизировать — свекровь, свекровь, старшие родственники. Шансов быть услышанным практически нет. А посему — врите, никому ничего не доказывайте.
5. Там, где дерзость выше добра и зла, ты тоже ничего не можешь сделать. Идеальный способ в этом случае — исключить из своей жизни обладателей этого удивительного качества.
Неадекватная любовь, или Почему женщины любят алкоголиков, наркоманов, социопатов, заключенных и других неудачников?
Многие женщины предпочитают алкоголиков, наркоманов, социопатов, заключенных и других неудачников.
За большую и чистую любовь? Вовсе нет, все эти жестокие чувства основаны на заниженной самооценке женщины. У таких отношений даже есть термин — созависимость. Что творится в голове у несчастного любовника? «Я не достоин богатого, красивого, самодостаточного человека. Рядом с ним я ничего не буду чувствовать. Но если я возьму с собой этого несчастного сироту, рядом с ним я почувствую себя королевой. «В этом сценарии есть и некая мазохистская составляющая — рядом с таким мужчиной всегда будет страдать женщина.«О, и это то, о чем я много знаю — я знаю и могу страдать, как никто другой. Это мне знакомо, а значит, хуже не станет. Конечно, так страшно жить в радости! «Но это еще не все: принимая такие отношения, женщина стремится отработать свои детские психотравмы — она хочет протянуть руку отцу и, наконец, быть принятой: теперь он поймет, что я хороший, самый любимый, папа поймет что только я его спасу!
Казалось бы, ситуация далеко не радужная, но что-то держит нашу героиню в этих отношениях.
И дело вовсе не в «злой любви — козу полюбишь».Какие преимущества получает созависимая женщина?
Извращенные пси-отношения часто популярны среди женщин, потому что:
— во-первых, рядом с ним она всегда королева — красивая, умная, очень хорошая. Он попадает в очередной бардак, она спасает его от полиции или вытаскивает из публичного дома от каких-то шлюх. Он берет от жизни все, что считает нужным, она получает адреналин и почетное звание спасительницы;
— она всегда «здесь и сейчас».Ее партнер — бедный человек, где и в какой момент это непредсказуемо. Следовательно, созависимая женщина всегда находится в постоянном действии;
— получает признание. Когда что-то происходит, он голосом усталого беспокойного путника говорит ей: «Детка, ты одна такая, только ты меня спасешь, когда я буду в тюрьме, только ты будешь носить посылки. для меня. Все эти цыпочки воспитаны, все эти шлюхи — пустота, мясо, только ты со мной настоящий. «И ребенок растаял .
.. Наконец-то она получила заветные слова: я единственный, я любимый, я спаситель.И в голове все чаще и чаще проносится: «Это не могли его предыдущие женщины, но я могу его поправить. Со мной он наконец поймет, как жить. И даже если он не поймет, я оставлю в его жизни такой неизгладимый след! Никто не хотел спасать так, как я, я была готова для него на все, и он это знает! «
Реально прогноз печальный. Нечего и думать о таком волшебном признании ее чар. Женщина остается у разбитого корыта, вся ее жизнь разрушена.Она сделала несчастными себя, мужчину и детей. Созависимые женщины — убийцы и самоубийцы в одном флаконе, но они делают свою работу очень медленно. Даже если она расстается со своим неудачливым партнером, привычка скажется на ней — она выберет того же неудачника, а дети вырастут зависимыми людьми и неизбежно будут испытывать трудности в построении собственной жизни.
Это действительно сложная задача, требующая психотерапевтического вмешательства, и пары сеансов будет недостаточно.
Как правило, женщина приходит к специалисту совершенно истощенной: «Я уже не знаю, что испытываю к этому человеку»; или: «Я его уже ненавижу, мне такая жизнь надоела». Созависимость женщины — это такая же зависимость, как и наркотики. То есть, по сути, она в том же состоянии, что и ее возлюбленный, с той лишь разницей, что с мальчиком все в порядке, он берет от жизни то, что хочет, а она страдает от ее жертвы.
Ей предстоит кропотливая работа — осознать свою созависимость и увидеть, что именно: то, что она считает добром (свое спасение), на самом деле является злом, ее опора — болото, в котором она топит своего партнера, разрушает и уничтожает его, себя и своих детей.
Бабники тоже довольно близки к классу проблемных мужчин. Конечно, они более обеспеченные, без социопатических наклонностей, но женщине, живущей с таким мужчиной, иногда приходится нелегко — ведь у бабника очень мало времени на семью, ему нужно успеть согреть всех женщин.
Обычный бабник, мужское подсемейство
Так кто же бабник?
Это не просто мужчина, у которого много женщин, это мужчина-праздник, обаятельный, с лучезарной улыбкой, веселый и с деньгами, женщины редко скучают по такому.
Что он сам получает от многоженства? В первую очередь, самоутверждение в собственных глазах, в глазах друзей и коллег. Своими бесконечными интригами он пытается заполнить свою внутреннюю пустоту — мужчины несколько реже женщин обращаются к внутренней работе, им гораздо легче заполнить эту пустоту извне.
Классификация
Есть несколько типов бабников.
— Одинокий бабник … Это мужчина любой возрастной категории — в 30, в 40, в 50 он продолжает бегать по женщинам.Обычно в основе такого поведения лежит детская травма. Возможно, доминирующая мать регулярно подталкивала отца, и теперь он боится повторить отцовскую судьбу — быть поглощенным женщиной. Поэтому, как только он чувствует, что женщина ему открывается, он начинает немного ускользать, а затем просто исчезает с горизонта, оставляя ее в недоумении. Даже если наш холостяк-инфантиль успевает привязаться к женщине, он сразу включает режим амортизации: у нее не такая попка, и она не пекла блины, а походка у нее как у утки, и теперь она легко уходит от другого бабочка стремится к своему огню.
— Бабник женат … Этот тип периодически меняет жен. Он будет жить с одним, потом с другим. Не исключая, конечно, любовниц. Они, как никто другой, умеют говорить красивые слова, делать щедрые жесты, обаятельны и обходительны, женщины не могут устоять перед их чарами. Но результат один: новая жена, новая любовница, а удержать таких мужчин практически невозможно.
— Бабник-моралист … Женат на скучной женщине. Причем выбор был сделан по идеологическим соображениям.По этому типу все женщины развратницы, лишь немногие из них способны быть поваром, матерью, домохозяйкой и серой мышкой в одном лице. В такой женщине он чувствует себя уверенно. Да, она верная, добродетельная, прекрасная мать и хорошая хозяйка, но ему безумно скучно с ней. А потом отправляется на поиски приключений и шлепанцев с ярким оперением.
Почему так происходит, почему одни мужчины идут влево, если яблоко не попадает им в руки, а другие сознательно ищут этот адреналин, новые связи и не могут довольствоваться одним партнером, даже своей любимой? А причины распутства между тем являются конституциональными, это особенности работы нервной деятельности.
Как ни крути, но в этом вопросе преобладает биология, и только тогда накладываются психологические факторы, которые, однако, имеют поверхностное значение.
Почему красивая и умная девушка живет с неудачником, а выпускник ФИНЭК работает охранником
А женщины? Кто выбирает бабника в партнеры? Эта женщина, как и спутница социопата, наркомана и т. Д., Обладает гипертрофированным чувством «добра» и преданности. Она всем рассказывает, как ее собака бегает за каждой юбкой, как он всю жизнь ее травил, и при этом она такая верная, такая терпеливая, такая жертвенная, поседела, лысая из-за него.Жена бабника всегда на конкурсе: «Я единственная, к кому он всегда возвращается, я продолжаю быть в его жизни». Чтобы жить с бабником, нужны железные нервы — выдержать такой темп сможет не каждый: ждать, плакать в подушку и постоянно заниматься самобичеванием. Заменить бабника невозможно, с этим могут справиться только старость, болезнь и безденежье — подумайте, нужно ли вам такое счастье.
В качестве партнера для создания семьи этот тип мужчины совершенно не подходит.Пусть этот мужской праздник останется праздником — друга, любовника, советчика, но не более того. Что ж, если вы все же решитесь на такие отношения, постарайтесь сделать ваше сосуществование с ним максимально комфортным.
Причина всех этих болезненных отношений (и многих других жизненных неприятностей) — это, прежде всего, низкая самооценка, глубокое убеждение, черпаемое с детства: «Я не достоин лучшей жизни, я не достоин лучшей жизни». высокая зарплата, я не достоин этой шикарной брюнетки, я не достоин … »- нужное подчеркнуть или ввести свой вариант.Вспомните бесконечные родительские сравнения в детстве: «Посмотри на Петю, вот какой опрятный мальчик, а ты бестолочь, на которую ты так некрасивился», или: «Ой, какие у Ольги красивые волосы и отличница, а ходишь как лахудра, да тройняшки в дневнике носишь? Возможно, вы забыли обо всем этом, но бессознательное … оно все помнит. В итоге красивая и умная женщина живет с наркоманом, а выпускник финансово-экономического вуза всю жизнь проработал охранником в торговом центре — человек игнорирует свои возможности и продолжает рассказывать о своих страхах .
Кто-то решает продолжать жить с этими страхами, запертый в скорлупе своей обычной жизни и страданий, а кто-то готов поднять планку самооценки вверх. На самом деле, при методической работе и комплексном подходе к вопросу это вполне возможно.
Вероника Степанова — психолог, сексолог.
Родилась в 1978 году в Санкт-Петербурге. Она выпускница СПбГУ по специальности quot; Клиническая психология », имеет статус кандидата психологических наук, является членом Российской Психотерапевтической Ассоциации.
Вероника Степанова имеет опыт работы более 10 лет.
Она известна своими виртуальными техниками, например, по quot; Skypequot ;. А также по цене консультации, которая составляет 50 000 руб.
Узнать больше о ней и ее видеоконсультах можно по ссылкам:
- http: // psy. fm / stepanova /? page_id = 7
- http://www.mega-stars.ru/video-yt/eRc0uhPeEeY.php
- http://pj3.ru/stepanova
- http: // psy.
Сначала ответьте себе на вопрос — что делает психолог? Это только помогает взглянуть на свою ситуацию со стороны, но психолог не в состоянии разрешить эту ситуацию. Это напрямую зависит от самого человека.Никто лучше самого человека не знает, что именно происходит с ним и с ним. И ответственность за принятое решение лежит только на самом человеке. Как сказал
Федор Василюк: Психолог совсем не знаток бытовых советов, полученное им образование совершенно не совпадает с обретением мудрости, а значит, наличие диплома не дает ему моральных качеств. право давать конкретные рекомендации, как действовать в той или иной жизненной ситуации.Теперь вернемся непосредственно к психологу В. Степановой. Сегодня почему-то стало модно давать консультации по скайпу.
Но психолог должен чувствовать за бортом все настроения человека. Сильно сомневаюсь, что этому подвержена Степанова. Где хоть слово сказано, что она работает на quot; normalquot; работать помимо скайпа? Но ее консультация в рублях светит везде. 50 тысяч за встречу по скайпу и просто чтобы посмотреть на себя со стороны? Все это ерунда.
Вероника Степанова — довольно успешный специалист в области психологии. Практика заключается в том, что она может давать людям советы и ответы на их срочные вопросы через Skype.
Вероника Степанова родилась 14 августа 1978 года. В личной жизни не все хорошо — замужем, двоих детей в браке нет. У нее более 10 лет опыта.
Однако стоимость примы будет доступна не каждому — цена консультации равна 50 тысячам рублей.
Чтобы получить и записаться на консультацию, вам необходимо пройти процедуру регистрации на этом сайте.
А вот адрес группы Вероники Вконтакте — здесь тоже можно найти много полезной информации.
Мне кажется, что помощь через Skype не может быть полной, да еще за такие деньги, хотя решать только вам.
Психолог, как косметолог, гинеколог, на мой взгляд, должен быть деликатным, любить людей, корень профессионального выгорания ясен, и все это они получили.Но пс, мы не в муниципалитете. 50 штук, а то и 10 штук за треп ни о чем. Девочки, вы с дуба рухнули! Если вас обманывают и тратят такие деньги на психолога (пусть даже на гениального), то с вышкой действительно проблемы, они вас правильно используют. Поговори с мамой, сестрой, другом. Есть психологи гораздо дешевле и не хуже. Правду нужно найти. Из ее видео видно, что она грубая, даже в одном из своих видеороликов она говорит, что в университете ее не любили (в школе вообще везде), она не любит своих друзей (как появились друзья, если бы все любили не любишь ее?).Тетя-мизантроп. Насколько я понимаю, из обеспеченной семьи. Поскольку, чтобы раскрутить себя, психологу нужно вложить много денег. Вряд ли она психоаналитик, психотерапевт. Она просто психолог, у нее такие методы. Что это значит, вы пришли поговорить, то начинаются попытки психодиагностики.
То есть того жесткого разговора, которого вы боитесь, того диалога, которого вы избегаете с самим собой. Хайд мешает. Нашли проблему, четко сформулировали, поняли, что хотите, то что мешает, побывали в детстве, закопались там (сотня пр, мама виновата).Так уж получилось, что психологи очень помогают! один из них. То есть ваша душа постоянно ищет ответ, а потом, как крупинка, бросают вам мысль, над которой вы начинаете размышлять и находите ответ !!! Через время. Если у вас что-то не получается, значит, вы чего-то не знаете. Вы не догадываетесь, вы не понимаете. Вспышки осознания, открывающие вам глаза. Вы были слепы, теперь вы видели. Да, деньги часто бывают. Второй. Поддержать просто некого, выслушать, тоже функция психолога.Ну, допустим, вы любите ныть и жаловаться, все злятся, а вот близкие вас слушать устали. Иди заплати деньги и радуйся. Я просто хочу сказать, что никакой психолог не стоит столько по сути. Только ты спасешь себя!
Медицинский психолог Вероника Степанова родилась в Ленинграде (Санкт-Петербург) в 1978 году 14 августа.
В этом году Веронике исполнится 38 лет.
Место работы называется ФГБУ СПб НИПНИ им. В.М. Бехтерева, который находится в г.Петербург. Оказывается, он живет в Москве, а по работе ездит в Санкт-Петербург. Или просто работает из этого заведения, не выходя из дома. Как еще?
Стоимость сеанса Вероники Степановой — 50 000 рублей. Представьте, час с вами разговаривал человек, изучал вашу душу и ваши проблемы, а давайте такие деньги гоним. Я думаю, это перебор. Сам Вольф Мессинг себе этого не позволял.
Отзывы в Интернете о Веронике Степановой как психологе прямо противоположны.Одни утверждают, что лучше бы с ней не связываться, а другие наоборот настаивают, что лучшего психолога в их родной стране нет.
Сексолог и психолог Степанова Вероника работает с людьми удаленно через Skype. Людям легче, и ей хорошо. Кто решил наехать — бац, а связи нет.
Была на консультации по скайпу, заплатила много денег — такое ощущение, что думает очень медленно, пока не разобралась в сути проблемы — прошел уже час.
.. Я задавал общие вопросы, было такое ощущение, что она тянула время, чтобы раствориться до следующего quot; sessionquot; Так что она не смогла посоветовать ничего толкового, только несколько общих слов, которые мог бы сказать любой психолог, и в конце посоветовала мне подумать о смысле жизни — такое стандартное задание она дает каждому. Она гребла всех под одну гребенку, сплела некоторых людей с моими проблемами и некоторыми из моих личных фантазий, к которым мне нечего делать. В результате консультация оставила у меня стресс и чувство, что меня используют.
Мне кажется, что такой психолог будет интересен только мужчинам, которые не будут вникать в суть ее слов, потому что она ничем помочь не может, а если и сможет, то в таком медленном темпе потребуется 100 сеансы, то есть недоступные деньги, за которые она будет шикарно в Мексике, плевать на клиентов.
В общем, это неоправданно дорого, лучше за эти деньги пойти на несколько сеансов к нормальному психотерапевту
Вероника Степанова — психолог-новатор, так как консультации ведет онлайн по Skype.
Ее страницы во всех социальных сетях. Есть много видео, где она простым доступным для простого обывателя языком объясняет, как решать психологические проблемы. Отзывы варьируются от восторженных до отрицательных. Один все понимает, другие не понимают, о чем она говорит. Многих раздражают ее жесты руками. В общем, чтобы понять, нужно общаться самому. Стоимость консультации составляет 50 000 рублей, контакты для записи на прием есть на любой из ее страниц.
fm / stepanova /? page_id = 7Психолог Вероника Степанова: биография, личная жизнь
Altamente qualificato psicologo professionalista con una grande esperienza di lavoro, che ora è Molto Popolare — Veronica Stepanova. Biografia di lei, mentre sulle risorse estere non vengono replicati anche, в modo il nostro articolo sarà basata direttamente sulle parole dello psicologo, потому что приходит информация из официальной социальной сети.
биография
Степанова Вероника Юрьевна нато 14 АГОСТО 1978. Fino ad oggi, funziona in materia di istruzione, uno psicologo Clinico nel nome di San Pietroburgo ФГБУ НИПНИ В. М. Бехтерева.
Ha studiato Veronica Stepanova a St.Petersburg State University, presso la Facoltà di Psicologia presso il Dipartimento di Psicologia Medica e Psicofisiologia, dove ha consguito uniploma di laurea.
Inoltre, si è laureata anche dagli altri due istituzioni education, l’ultima delle quali è в Америке.Ciò conferma l’alta qualificazione, для того, чтобы получить новые отзывы Вероники Степановой с auguri e ringraziamenti. L’istruzione Secondaria имеет школу №77 в Сан-Пьетробурго. Чаще всего это все 11 классов.
семья
Психолог Вероника Степанова предпочитает не различную информацию о своем здоровье. Ma noi sappiamo che ce n’è uno. Purtroppo, non le reti basate su Internet una fonte non è possible sapere con chi sposare Veronica Stepanova.Vita personale mentre non del tutto nascosto: è noto che una donna ha due figlie.
Лучшее, Александра Степанова, ora 2016 l’anno che vivono in America, e sostiene attivamente il lavoro di sua madre, prendendo una rassegna video delle sue lezioni aperte e le обсуждении. Con la figlia pi giovane della stella in linea quasi mai parted. Получите персональную страницу в социальной сети, чтобы увидеть ваши фотографии, созданные из всего мира, и сделать это с вашей собственной семьей, отслеживающей темп приватности в прекрасном сеттимане.
Attività su YouTube
Персональный блог ha non solo la figlia pi grande, ma anche la Veronica Stepanova. psicologo diviso la gente comptenza, dare consigli, discutere i vostri canali принципиальные проблемы della società e, naturalmente, la malattia mentale, la loro sottigliezza e caratteristiche.
Канал содержит больше 50 000 поклонников, которые хранят свои любимые песни, лавры и другие видео, созданные более чем за 200 миллионов визуализаций.Комментарии к Веронике Степановой в этом видео с регулярными сообщениями, а также с консультациями по Skype и, возможно, с потенциальными контактами с частными сообщениями.
канал Вероники Степановой был создан 23 августа 2012 года, он был создан более поздним годом — 3 года назад. Всего отзывов на 2016 год — это 7 миллионов и больше!
Это сообщение содержит единую информацию, которая является уникальной, потому что это невозможно «получить» все изображения разных сторон.
Discutere qualsiasi argomento, psicologo Clinico fa con tanta professionalità che il pubblico l’impressione che al momento in cui personalmente consultarsi con il.
Parlando delle varie diagnosi, Veronica Stepanova fa semper la sua mente e deviazioni calma il pubblico nel caso in cui implvvisamente soffrono di questo. I video sono anche spesso divertente nella natura, dove la Hamming psicologo, canta le canzoni con la sua amata figlia, e simili. Подавайте как можно быстрее и грандиозными темами, приготовленными по вкусу в простой промессе.
профанита
Approccio specifico di questa donna, alcuni considerano sbagliato, ma con l’aiuto di affermazioni audaci e parole in grassetto psicologo riesce ad attirare l’attenzione dei giovani.
Alcuni vanno sul suo canale, solo per ridere, rilassarsi, durante il quale untariamente apprendere nuove e utili informazioni supersone, la loro natura, e la malattia mentale.
Вероника Степанова наиболее важная тема для обсуждения и всех проблем с производным. Tale mossa audace psicologa fa con dignità, non si permette di eccesso, e, a dispetto di parolacce, non ha mai offende persone o alcune deviazioni psicologiche. Possiamo dire che, al contrario: si riferisce al malato di mente con un certo rispetto e cerca di essere spiegato in un linguaggio accessibile.
preferenze sessuali
Этот аргумент может быть провокатором, сделанным в реальной жизни с большим количеством людей, которые могут заинтересовать все ответы на вопросы. Cingolato видео в блоге Степанова, si può dedurre che le piacciono gli uomini con tendenze insolite.
Il fatto che la psicologia per sé pi di una volta e non è timido di ricordare: ragazzi e uomini in abiti femminili, con tritare abitudini o l’amore di vestire in abiti non sono conci al pavimento lei è attta da sua prima giovinezza.
A causa del fatto che la donna non nasconde questo fatto volgare (secondo la maggior parte delle persone в России), le sue parole non hanno causato il desiderio sconsiderato di condannare qualcun altro preferenze personali.
Così lo psicologo non riesce a ispirare fiducia nel suo pubblico, perché è completetamente aperta di fronte a loro, anche se si tratta di una questione che non deve essere messo in mostra.
персональная
Вероника Степанова предлагает качественное персональное предложение с большим количеством голосов, и все это охраняется положительно. Il primo — una persona aperta, senza complessi e le credenze imposti dalla società.
Questa persona ha un carattere difficile imperioso, non perdonando lamentele o semplicemente non li percepiscono. Questa qualità permette di essere il più professionalale nelle loro dichiarazioni, results, e anche una semplice convert con persone che hanno bisogno del suo aiuto.
Lo psicologo semper Preciso nelle loro parole e non li abbandona, così da rendere удобен для защиты своего видеоблога, perché assicura una strutturata, affidabilità e coerenza. Che interessano il tema generale, Вероника Степанова dice semper i rami adiacenti ad esso, e con l’aiuto dei suoi spettatori Possono semper trovare esattamente le information, che sono interessati al momento.
Anche se le dichiarazioni di operatori sanitari Possono spesso sentire le cose totalmente inaccettabili associati con scarico fecale, barzellette sconce e tutti nelle vicinanze, ammiratori non percepiscono questo come qualcosa di serio.Con l’aiuto di questo special pubblico gestisce una bella risata e rilassarsi ù.
в расчете на
Я модернизирую и отклоняю подходящие предложения, как Così gravi, come la psichiatria e la psicofisiologia, e, talvolta, non può che, andare a beneficio se le persone sanno davvero come utilizzare queste tecniche.
Вероника Степанова — Психолог и она одна из лучших в области инноваций, связанных с навыками и достаточным качеством.
концертов | Вероника Белл, Сопрано
HAPPY HOUR
С КОЛОКОЛОМ И ДРУЗЬЯМИ
Добро пожаловать в наш виртуальный концертный зал! Из-за карантина COVID19 мы сейчас работаем онлайн.
Узнайте больше ЗДЕСЬ
Песни в кадре
Два влюбленных вампира, рок-звезда, умирающая от СПИДа, мальчик, живущий на железнодорожной станции в Париже, рыбак, который любит петь; что у них может быть общего? Ничего, кроме одного: все они персонажи американских фильмов.
Некоторые из них были настоящими людьми, некоторые были созданы сценаристами и режиссерами, и все же они стали частью нашей жизни, захватили наше воображение, взволновали нас, напугали, затронули наши сердца.
Сопрано Лола Уотсон, давняя жительница городов-побратимов, оперная певица с долгой и успешной карьерой. Она появлялась в главных ролях на сценах как в Европе, так и в США.
Вероника Белл — родившаяся в России обладательница наград классическая вокалистка и записывающаяся артистка, которая путешествовала по миру в качестве концертной солистки.
Что у них общего? Много! Лола и Вероника встретились в Сан-Франциско и стали верными друзьями, но вскоре им пришлось разойтись в разных направлениях: мисс Уотсон вернулась в Миннеаполис, где она сейчас проживает, а мисс Белл переехала в Лос-Анджелес. Так случилось, что они оба занялись своей карьерой и своими семьями и потеряли связь. Теперь, пятнадцать лет спустя, они празднуют свое воссоединение первым совместным выступлением, на которое вы сердечно приглашены.
В красивой комнате искусств Объединенной методистской церкви на Хеннепин-авеню, наполненной бесценными произведениями искусства, Лола и Вероника вместе со знаменитым концертмейстером Томасом Барчем за фортепиано исполнят музыку американского кино. Они также расскажут вам о роли музыки, которую сыграла в создании некоторых самых известных фильмов, и о том, как она повлияла на настроение, помогла раскрыть сущность персонажей и сформировала самые запоминающиеся сцены, сделав их знаковыми. В программе арии и дуэты из классических опер и бродвейских мюзиклов, авторские песни и джазовые стандарты, ставшие частью саундтреков к фильмам.
2021
02,14
Сейчас и навсегда | Онлайн | ИНФОРМАЦИЯ
2020
12.20
Рождественская сказка | Онлайн | ИНФОРМАЦИЯ
09.20
Европейский тур | Австрия-Норвегия ДАТЫ И ИНФОРМАЦИЯ О БИЛЕТЕ НЕОБХОДИМО ОТЛОЖЕНЫ
06.
06.20 17:00Вероника Белл и Даниэль Шиндаров | Лос-Анджелес, Калифорния, ОТЛОЖЕН
04.24.20 19:00
ПЕСНИ В КАДРЕ | Hennepin Ave Объединенная методистская церковь | Миннеаполис, Миннесота, ОТЛОЖЕН,
29.03.20 17:00
ВСЕ ЦВЕТА ВЕСНЫ | Салемская лютеранская церковь | Лос-Анджелес, Калифорния ПОКУПКА БИЛЕТОВ ОТЛОЖЕНА
03.07.20 12:00
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ЖЕНСКИЙ ДЕНЬ | город Западного Голливуда | БЕСПЛАТНЫЙ ВХОД
2019
11.18.19 17:30
ПОЧТА АМЕРИКАНСКОГО ЛЕГИОНА 43 | ТОЛЬКО ПРИГЛАШЕНИЕ, Лос-Анджелес, Калифорния, свяжитесь с В. Белл
19.10.19 19:30
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ФЕСТИВАЛЬ ГИТАР ФРЕСНО | Государственный университет Фресно | Фресно, Калифорния. ПОДРОБНЕЕ TBA
29.09.19 15:00
ИГРОКИ В ВИНДСОНЕ — Фантазии | Вифлеемская лютеранская церковь | Гранада-Хиллз, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
28.
08.19 10:30 и 28.19WAA Витрина | JW Marriott | Лос-Анджелес, Калифорния, ОТКРЫТО ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ
07.27.19 19:30
Международный музыкальный фестиваль в Беверли-Хиллз | Особняк Грейстоун | Беверли-Хиллз, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
07.06.19 15:00
Вероника Белл и Даниэль Шиндаров | Библиотека Дюранта | Лос-Анджелес, Калифорния, ОТКРЫТ ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ
19.06.19 15:30
Я ВИЖУ ВАШЕ ИЗОБРАЖЕНИЕ | Грандвью Терраса | Вествуд, Калифорния ЧАСТНОЕ СОБЫТИЕ
27.04.19 19:30
Альбом классического кроссовера MIDNIGHT AFFAIRS | CD RELEASE PARTY | Тимеле Артс | Лос-Анджелес, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
01.27.19 16:30
WINDSONG PLAYERS — Зимний магнетизм | Вифлеемская лютеранская церковь | Гранада-Хиллз, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
2018
11.11.18 17:00
Мелоди Экстраодинарная — Вероника Белл и Даниэль Шиндаров | Русский зал | Лос-Анджелес, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
27.
10.18 19:00АНСАМБЛЬ КАМЕРЫ ИГРОКОВ WINDSONG | Церковь Святого Луки Врача | Монровия, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
10.13.18 15:00
ЛЮБОВНЫЕ ПЕСНИ — Вероника Белл и Якоб Нахман | Библиотека Дюранта | Лос-Анджелес, Калифорния, ОТКРЫТ ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ
21.07.18 15:00
Вероника Белл и Анатолий Берлин | Библиотека Дюранта | Лос-Анджелес, Калифорния, ОТКРЫТО ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ
21.06.18 15:00
ПЕСНИ ДО СУМЕРКА — Вероника Белл и Алла Конвиссер | Грандвью Террас | Лос-Анджелес, Калифорния ЧАСТНОЕ СОБЫТИЕ
18.05.18 19:00 и 05.19.18 14:00
ИГРОКИ ВЕТРА и СОВРЕМЕННЫЙ БАЛЕТ | Танцевальный уличный театр | La Canada, CA КУПИТЬ БИЛЕТЫ
05.12.18 17:00
ВЕЧЕР РУССКОЙ ХУДОЖЕСТВЕННОЙ ПЕСНИ | 3759 Stone Canyon Ave, Sherman Oaks, CA
БИЛЕТЫ НА ДВЕРИ02.10.18 16:00
ПУШКИН, ПОСЛЕДНИЙ ДВОЙНОЙ | Плумер Парк, Фиеста Холл | Западный Голливуд, Калифорния БИЛЕТЫ У ДВЕРИ
28.
01.18 20:00ЗВЕЗДНАЯ МЕЛОДИЯ | Национальный музей искусств | Антигуа, Гватемала | ЧАСТНОЕ МЕРОПРИЯТИЕ, только по приглашениям (свяжитесь с нами)
01.18.07, 15:00,
АНСАМБЛЬ КАМЕРЫ ИГРОКОВ WINDSONG | Центр искусств МакГроарти | Лос-Анджелес, Калифорния БИЛЕТЫ НА ДВЕРИ
2017
12.02.17 12:00
RATTO’S | Окленд, Калифорния, ОТКРЫТ ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ
12.02.17 20:00
КОГДА НОЧЬ ПАДЕТ | Частная резиденция | Окленд, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
11.11.17 19:30
ВЕРОНИКА БЕЛЛ И ЖИСЛЬ КРОГСЕТ (Норвегия) | CSULA | Лос-Анджелес, Калифорния, ОТКРЫТО ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ,
09.10.17 17:30
АНСАМБЛЬ КАМЕРЫ ИГРОКОВ WINDSONG | Центр знаменитостей | Лос-Анджелес, Калифорния БИЛЕТЫ
20.08.17 19:00
ВЕНСКАЯ НОЧЬ | Шато дю Сюро | Окхерст, Калифорния БРОНИРОВАНИЕ
31.
07.17, 19:30МУЗЫКАЛЬНЫЙ ФЕСТИВАЛЬ В БВЕРЛИ-ХИЛЛЗ | Особняк в Грейстоуне | Беверли-Хиллз, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
13.07.17, 20:00
ВЕРОНИКА БЕЛЛ и АЛЛА КОНВИССЕР | Лос-Анджелес, Калифорния ЧАСТНОЕ СОБЫТИЕ
05.28.17 17:30
CHERCHEZ LA FEMME — Вероника Белл и Сусанна Порецки | Сан-Диего, Калифорния БРОНИРОВАНИЕ
20.05.17 17:00
CHERCHEZ LA FEMME — Вероника Белл и Сусанна Порецки | Лос-Анджелес, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
05.06.17 21:00
ВЕРОНИКА БЕЛЛ и ЖИЗЛЬ КРОГСЕТ | Мэрия | Бергамо, Италия ИНФОРМАЦИЯ О БИЛЕТЕ
04.20.17 21:00
ВЕРОНИКА БЕЛЛ и ЕЛИЗАВЕТА БАКЕРКИНА | Санта-Мария-де-Педральбес | Барселона, Испания КУПИТЬ БИЛЕТЫ
26.03.17 17:00
Вероника Белл и Елена Степанова | JCC San Francisco КУПИТЬ БИЛЕТЫ
26.02.17 17:30
Вероника Белл и камерный ансамбль WINDSONG PLAYERS | БИЛЕТЫ в церковь Ковенант в Орлиной Скале
21.
01.17 18:00BEL CANTO and BEYOND | Фиеста Холл, Пламмер Парк | Западный Голливуд, Калифорния БИЛЕТЫ
2016
12.15:16, 17:30,
Праздничный концерт ПОД ЗИМНИМИ ЗВЕЗДАМИ | Место проведения уточняется | Лос-Анджелес, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
20.11.16 15:30
Вероника Белл и камерный ансамбль WINDSONG PLAYERS | Лос-Анджелес, Калифорния
КУПИТЬ БИЛЕТЫ11.04.16 15:00
BELLVIEW CONCERT SERIES | Bellview Terrace | Лос-Анджелес, Калифорния ЧАСТНОЕ СОБЫТИЕ
09.10.16 17:00
С ДНЕМ РОЖДЕНИЯ, АЛИСА! | Частная резиденция | Лос-Анджелес, Калифорния, ТОЛЬКО ПРИГЛАШЕНИЕ
08.21.16 20:00
НОЧЬ В ВЕНЕ | Шато дю Сюро | Окхерст, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
17.07.16 10:00
СЕКРЕТНОЕ УТРО | Епископальная церковь Св. Матьяша | Whittier, CA INFORMATION
24.
06.16 19:30GRAND PASSION | Центр искусств Пьемонта | Пьемонт, Калифорния КУПИТЬ БИЛЕТЫ
Джонатан Линч, Ph.D. — Кафедра растениеводства
Фенотипическое разнообразие корней фасоли обыкновенной выявляет противоположные стратегии получения почвенных ресурсов среди генофондов и рас
Crop Science, Jochua, Celestina N., Строк, Кристофер Ф., Линч, Джонатан П., 2020
Сравнительная феномена корневой архитектуры однолетних зернобобовых культур
Crop Science, Берридж, Джеймс Д., Рангараджан, Харини, Линч, Джонатан П., 2020
Пространственно-временные вариации в водопоглощении семенной и узловой корневой системами растений ячменя, выращиваемых в почве
Frontiers in Plant Science, Schneider, Hannah M., Postma, Johannes A., Kochs, Johannes, Pflugfelder, Daniel, Lynch, Jonathan P. , ван Дусхотен, Дагмар, 2020
Множественные интегрированные фенотипы корней связаны с повышенной засухоустойчивостью.
Plant Physiology, Klein, Stephanie P.
, Шнайдер, Ханна М., Перкинс, Олден К., Браун, Кэтлин М., Линч, Джонатан П., 2020
Многоуровневые вычислительные модели могут служить ориентиром для экспериментов и целевых измерений для улучшения сельскохозяйственных культур.
Plant Journal, Benes, Bedrich, Guan, Kaiyu, Lang, Meagan, Long, Stephen P., Lynch, Jonathan P., Marshall-Colón, Amy, Peng, Bin, Шнабл, Джеймс, Sweetlove, Ли Дж., Терк, Мэтью Дж., 2020
Генетический контроль архитектурной пластичности корней кукурузы
Journal of Experimental Botany, Schneider, Hannah M., Кляйн, Стефани П., Хэнлон, Мередит Т., Норд, Эрик А., Кэпплер, Шон, Браун, Кэтлин М., Уорри, Эндрю, Бхосейл, Рахул, Линч, Джонатан П., Додд, Ян, 2020
Генетический контроль анатомической пластичности корней кукурузы
Plant Genome, Schneider, Hannah M., Klein, Stephanie P., Hanlon, Meredith T., Kaeppler, Shawn, Brown, Kathleen M., Lynch, Jonathan P., 2020
Генетические компоненты корневой архитектуры и анатомические поправки к стрессу из-за дефицита воды у ярового ячменя
Plant, Cell and Environment, Oyiga, Benedict C.
, Пальчак, Янина, Войцеховски, Тобиас, Линч, Джонатан П., Наз, Али А., Леон, Йенс, Баллвора, Агим, 2020
Геномы кукурузы в поля (G2F)
BMC Research Notes, McFarland, Bridget A., Alkhalifah, Naser, Bohn, Martin, Bubert, Jessica, Buckler, Edward S., Ciampitti, Ignacio, Edwards, Jode, Ertl, David, Gage, Джозеф Л., Фалькон, Селеста М., Флинт-Гарсия, Шерри, Гор, Майкл А., Грэм, Кристофер, Хирш, Кэндис Н., Холланд, Джеймс Б., Худ, Элизабет, Хукер, Дэвид, Джаркин, Диего, Кэпплер, Шон М., Нолл, Джозеф, Крюгер, Грег, Лаутер, Ник, Ли, Элизабет К., Лима, Даян К., Лоренц, Аарон, Линч, Джонатан П., Маккей, Джон, Миллер, Натан Д., Лоси, Стивен П. , Мюррей, Сет С., Нельсон, Ребекка, Поудьял, Кристина, Рошфорд, Торберт, Родригес, Оскар, Ромай, Мария Синта, Шнабл, Джеймс К., Шнабл, Патрик С., Скалли, Брайан, Сехон, Раджандип, Сильверстайн, Кевин, Сингх, Маниндер, Смит, Маргарет, Сполдинг, Эдгар П., Спрингер, Натан, Телен, Курт, Томисон, Питер, Туинстра, Митчелл, Уоллес, Джейсон, Уоллс, Рамона, Уиллс, Дэвид, Виссер, Рэндалл Дж.
, Сюй, Вэньвэй, Йе, Ченг Тин, Де Леон, Наталья, 2020
Должна ли пластичность корней быть целью селекции сельскохозяйственных культур?
Frontiers in Plant Science, Schneider, H, Lynch, Jonathan, 2020 г.
Вторичный рост корней: неизученный компонент приобретения почвенных ресурсов.
Анналы ботаники, Строк, C, Линч, Джонатан, 2020
Фенотипическое разнообразие корней фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.) свидетельствует о контрастной адаптации к эдафическому стрессу
Crop Science, Jochua, C, Strock, C, Lynch, Jonathan, 2020
Анатомические особенности корней способствуют более глубокому укоренению кукурузы (Zea mays L.) в уплотненных полевых условиях
Journal of Experimental Botany, Vanhees, D, Bengough, G, Mooney, S, Lynch, Jonathan, 2020
Анализ стратегий отбора керна почвы для оценки глубины корня.
Феномика растений, Берридж, J, Блэк, C, Норд, E, Постма, J, Сидху, J, Йорк, L, Линч, Джонатан, 2020
Фенотипы корневой метаксилемы и архитектуры объединяются для регулирования водопотребления в условиях стресса засухи
Растение, клетки и среда, Строк, Кристофер Ф.
, Берридж, Джеймс Д., Ниемик, Миранда Д., Браун, Кэтлин М., Линч, Джонатан П., 2020
Относительная полезность агрономических, фенологических и морфологических признаков для оценки взаимодействия между генотипом и средой у инбредов кукурузы
Crop Science, Falcon, Celeste M., Kaeppler, Shawn M., Spalding, Edgar P., Miller, Nathan D., Haase , Николас, Аль-Халифа, Насер, Бон, Мартин, Баклер, Эдвард С., Кэмпбелл, Дарвин А., Чампитти, Игнасио, Коффи, Лиза, Эдвардс, Джод, Эртл, Дэвид, Флинт-Гарсия, Шерри, Гор, Майкл А., Грэм, Кристофер, Хирш, Кэндис Н., Холланд, Джеймс Б., Яркин, Диего, Нолл, Джозеф, Лаутер, Ник, Лоуренс-Дилл, Кэролайн Дж., Ли, Элизабет К., Лоренц, Аарон, Линч, Джонатан П., Мюррей, Сет С., Нельсон, Ребекка, Ромэй, М. Синта, Рошфорд, Торберт, Шнабл, Патрик С., Скалли, Брайан, Смит, Маргарет, Спрингер, Натан, Туинстра, Митчелл Р., Уолтон, Рене , Велдекидан, Теклемариам, Виссер, Рэндалл Дж., Сюй, Венвэй, де Леон, Наталья, 2020
Тематическое исследование эффективности корневого фенотипического отбора на устойчивость к почвенному стрессу в малозатратном сельском хозяйстве
Field Crops Research, Burridge, James D.
, Финдейс, Джилл Л., Джочуа, Селестина Н., Мигель, Магалхаес А., Мубичи-Кут, Фрида М., Квинхентос, Мария Л., Ксеринда, Соарес А., Линч, Джонатан П., 2019
Кортикальная анатомия корня связана с дифференциальной колонизацией патогенными и симбиотическими грибами в растениях, клетках и окружающей среде кукурузы
, Galindo-Castañeda, Tania, Brown, Kathleen M., Kuldau, Gretchen A., Roth, Gregory W., Wenner, Nancy G. , Рэй, Сваямджит, Шнайдер, Ханна, Линч, Джонатан П., 2019
Генотипические вариации и влияние азотного стресса на анатомию корня кукурузы специфичны для узла
Journal of Experimental Botany, Yang, Jennifer T., Шнайдер, Ханна М., Браун, Кэтлин М., Линч, Джонатан П., Гиффорд, Мириам, 2019
Признаки корней лопатообразности, оцененные с помощью панели кукурузы EURoot, в значительной степени наследуются в разных средах, но демонстрируют низкое взаимодействие между генотипами и азотом
Euphytica, Le Marié, Chantal A., York, Larry M., Strigens, Alexandre, Malosetti, Marcos, Camp, Karl Хайнц, Джулиани, Сильвия, Линч, Джонатан П.
, Хунд, Андреас, 2019
Лазерная абляционная томография для визуализации корневой колонии эдафическими организмами
Journal of Experimental Botany, Strock, Christopher, Schneider, Hannah, Galindo-Castañeda, Tania, Hall, Benjamin, Van Gansbeke, Bart, Mather, Diane, Roth, Mitchell, Chilvers, Мартин, Го, Сянгронг, Браун, Кэтлин, Линч, Джонатан, 2019 г.
Архитектура корня проростков и ее связь с урожайностью семян в различных средах в Phaseolus vulgaris
Field Crops Research, Strock, Christopher F., Берридж, Джеймс, Массас, Аника С.Ф., Бивер, Джеймс, Биби, Стивен, Камило, Сэмюэл А., Фури, Дейдре, Джочуа, Селестина, Мигель, Магалаес, Миклас, Филипп Н., Мндолва, Энинка, Нчимби-Мсолла, Сьюзан, Полания, Хосе, Порч, Тимоти Г., Росас, Хуан Карлос, Трапп, Дженнифер Дж., Линч, Джонатан Пол, 2019
Трехмерный анализ биологических систем с помощью новой техники лазерной абляции (том 31, 022602, 2019)
ЖУРНАЛ ЛАЗЕРНЫХ ПРИЛОЖЕНИЙ, Холл, Бенджамин, Ланба, Ашиш, Линч, Джонатан, 2019
Фенотипы корней для лучшего захвата питательных веществ: недостаточно используемые возможности для глобального сельского хозяйства.
Новый фитолог, Линч, Джонатан, 2019 г.
Генетические компоненты корневой архитектуры и корректировки анатомии к стрессу из-за дефицита воды у ярового ячменя
РАСТИТЕЛЬНАЯ КЛЕТКА И СРЕДА, Ойига, Бенедикт, Пальчак, Янина, Войцеховски, Тобиас, Линч, Джонатан, Наз, Али, Леон, Йенс, Баллвора, Агим, 2019 г.
Родительские эффекты и обеспечение в условиях засухи и стресса с низким содержанием фосфора у фасоли обыкновенной
Food and Energy Security, Lorts, Claire, Lynch, Jonathan P., Brown, Kathleen M., 2019
GWAS с одним и несколькими признаками идентифицирует генетические факторы, связанные с производственными признаками фасоли обыкновенной в условиях абиотического стресса
G3: Genes, Genomes, Genetics, Oladzad, Atena, Porch, Timothy, Rosas, Juan Carlos, Moghaddam, Samira Mafi, Beaver, James , Биб, Стив Э., Берридж, Джимми, Джочуа, Селестина Нхагупана, Мигель, Магалаес Амаде, Миклас, Филип Н., Ратц, Бодо, Уайт, Джеффри У., Линч, Джонатан, МакКлин, Филлип Э.
, 2019
Носитель притока ауксина из риса OsAUX1 способствует удлинению корневых волосков в ответ на низкий уровень внешнего фосфата
Nature Communications, Giri, Jitender, Bhosale, Rahul, Huang, Guoqiang, Pandey, Bipin K., Паркер, Хелен, Заппала, Сьюзан, Ян, Цзин, Диеварт, Энн, Бюро, Шарлотта, Юнг, Карин, Прайс, Адам, Роуз, Терри, Ларье, Антуан, Майрхофер, Стефан, Старрок, Крейг Дж., Уайт, Филип , Дюпюи, Лайонел, Хоуксфорд, Малкольм, Перин, Кристоф, Лян, Ванки, Перет, Бенджамин, Ходжман, Чарли Т., Линч, Джонатан, Виссува, Матиас, Чжан, Дабинг, Придмор, Тони, Муни, Саша Дж., Гудердони , Эммануэль, Сваруп, Ранджан, Беннетт, Малкольм Дж., 2018
Механистическая основа для ауксин-зависимого удлинения корневых волосков Arabidopsis до низкого уровня внешнего фосфата
Nature Communications, Bhosale, Rahul, Giri, Jitender, Pandey, Bipin K., Гиль, Рикардо Ф.Х., Хартманн, Аня, Трейни, Ричард, Трускина, Екатерина, Лефтли, Никола, Хэнлон, Мередит, Сваруп, Камаль, Рашед, Афаф, Восс, Юте, Алонсо, Хосе, Степанова, Анна, Юн, Чонга, Юнг, Карин, Браун, Кэтлин М.
, Линч, Джонатан П., Долан, Лиам, Верну, Тева, Бишопп, Энтони, Уэллс, Даррен, фон Вирен, Николаус, Беннетт, Малкольм Дж., Сваруп, Ранджан, 2018
Реакция на ксерветвление подавляет образование боковых корней, когда корни не контактируют с водой
Current Biology, Orman-Ligeza, Beata, Morris, Emily C., Паризот, Борис, Лавин, Тристан, Бабе, Орели, Лигеза, Александр, Кляйн, Стефани, Старрок, Крейг, Суан, Вей, Новак, Ондржей, Льюнг, Карин, Фернандес, Мария А., Родригес, Педро Л., Додд , Ян К., Де Смет, Айв, Шомон, Франсуа, Батоко, Анри, Перильё, Клэр, Линч, Джонатан П., Беннет, Малькольм Дж., Бекман, Том, Дрей, Ксавье, 2018
Затопление системы пойменных озерных лесов
Экология и управление водно-болотными угодьями, Фернандо, Дениз Р., Линч, Джонатан Пол, Райхман, Сьюзи М., Кларк, Гэри Дж., Миллер, Ребекка Э., Дуди, Таня М., 2018
Совместная оптимизация фенотипов осевых корней для получения азота и фосфора у фасоли обыкновенной
Annals of Botany, Rangarajan, Harini, Postma, Johannes A.
, Lynch, Jonathan Paul, 2018
Геномы кукурузы в полях
BMC Research Notes, Alkhalifah, Naser, Campbell, Darwin A., Falcon, Celeste M., Gardiner, Jack M., Miller, Nathan D., Romay, Maria Cinta, Walls, Ramona, Walton, Renee, Йе, Ченг Тинг, Бон, Мартин, Буберт, Джессика, Баклер, Эдвард С., Чампитти, Игнасио, Флинт-Гарсия, Шерри, Гор, Майкл А., Грэм, Кристофер, Хирш, Кэндис, Холланд, Джеймс Б., Хукер, Дэвид, Кэпплер, Шон, Нолл, Джозеф, Лаутер, Ник, Ли, Элизабет К., Лоренц, Аарон, Линч, Джонатан П., Мус, Стивен П., Мюррей, Сет К., Нельсон, Ребекка, Рошфорд, Торберт, Родригес, Оскар, Шнабл, Джеймс К., Скалли, Брайан, Смит, Маргарет , Спрингер, Натан, Томисон, Питер, Туинстра, Митчелл, Виссер, Рэндалл Дж., Сюй, Венвэй, Эртл, Дэвид, Шнабл, Патрик С., Де Леон, Наталья, Сполдинг, Эдгар П., Эдвардс, Джод, Лоуренс-Дилл, Кэролайн Дж., 2018
Уменьшение корковой нагрузки корней улучшает рост и урожай зерна при низкой доступности фосфора в кукурузе.
Растение, клетки и окружающая среда, Галиндо-Кастаньеда, Таня, Браун, Кэтлин Мари, Линч, Джонатан Пол, 2018
Буферная доставка фосфата арабидопсису изменяет реакцию на низкий уровень фосфата
Journal of Experimental Botany, Hanlon, Meredith T.
, Ray, Swayamjit, Saengwilai, Patompong, Luthe, Dawn, Lynch, Jonathan P., Браун, Кэтлин М., 2018
Оптимизация фенотипов корней с точки зрения устойчивости к засухе
J Experimental Botany, 2018
Функциональные последствия старения коры корня корня для захвата почвенных ресурсов
Plant and Soil, Schneider, H, Lynch, J, 2018
Этилен опосредует формирование коркового старения корня ячменя
Annals of Botany, Schneider, Hannah, Wojciechowski, Tobias, Postma, Johannes, Brown, Kathleen, Lynch, Jonathan, 2018
Этилен модулирует старение коркового вещества корня ячменя
Annals of Botany, Schneider, Hannah M., Войцеховски, Тобиас, Постма, Йоханнес А., Браун, Кэтлин Мари, Линч, Джонатан Пол, 2018
Снижение вторичного роста корней как стратегия получения фосфора
Plant Physiology, Strock, Christopher F., De La Riva, Laurie Morrow, Lynch, Jonathan Paul, 2018
Большое количество корней кроны улучшает кормление верхнего слоя почвы и усвоение фосфора
Физиология растений, Сан, Баору, Гао, Инчжи, Линч, Джонатан П.
, 2018
Большая плотность боковых корней у кукурузы улучшает усвоение фосфора из почвы с низким содержанием фосфора
Journal of Experimental Botany, Jia, Xucun, Liu, Peng, Lynch, Jonathan Paul, 2018
Влияние искусственного отбора на фенотипическую пластичность кукурузы
Nature Communications, Gage, Joseph L., Яркин, Диего, Ромай, Синта, Лоренц, Аарон, Баклер, Эдвард С., Кэпплер, Шон, Алхалифа, Насер, Бон, Мартин, Кэмпбелл, Дарвин А., Эдвардс, Джод, Эртл, Дэвид, Флинт-Гарсия, Шерри , Гардинер, Джек, Гуд, Байрон, Хирш, Кэндис Н., Холланд, Джим, Хукер, Дэвид К., Нолл, Джозеф, Колкман, Джудит, Крюгер, Грег, Лаутер, Ник, Лоуренс-Дилл, Кэролайн Дж., Ли , Элизабет, Линч, Джонатан, Мюррей, Сет К., Нельсон, Ребекка, Петцольдт, Джейн, Рошфорд, Торберт, Шнабл, Джеймс, Шнабл, Патрик С., Скалли, Брайан, Смит, Маргарет, Спрингер, Натан М., Сринивасан, Срикант, Уолтон, Рене, Велдекидан, Теклемариам, Виссер, Рэндалл Дж., Сюй, Венвэй, Ю, Цзяньминь, Де Леон, Наталья, 2017
Старение коркового вещества корня улучшает рост при неоптимальном доступе к N, P и K.
Физиология растений, Шнайдер, Ханна М., Постма, Йоханнес А., Войцеховски, Тобиас, Куппе, Кристиан, Линч, Джонатан П., 2017
OpenSimRoot
New Phytologist, Postma, Johannes A., Kuppe, Christian, Owen, Markus R., Mellor, Nathan, Griffiths, Marcus, Bennett, Malcolm J., Линч, Джонатан П., Ватт, Мишель, 2017
Кортикальное старение корня снижает дыхание корней, содержание питательных веществ и радиальный перенос воды и питательных веществ в ячмене
Растение, клетки и окружающая среда, Schneider, Hannah M., Wojciechowski, Tobias, Postma, Johannes A., Brown, Kathleen M., Lücke, Andreas, Цейслер, Виктория, Шрайбер, Лукас, Линч, Джонатан П., 2017
Crops in silico
Frontiers in Plant Science, Marshall-Colon, Amy, Long, Stephen P., Allen, Douglas K., Allen, Gabrielle, Beard, Daniel A., Бенес, Бедрич, фон Каммерер, Сюзанна, Кристенсен, Эй Джей, Кокс, Донна Дж., Харт, Джон К., Херст, Питер М., Каннан, Кавья, Кац, Дэниел С., Линч, Джонатан П., Миллар, Эндрю Дж.
, Паннеерселвам, Баладжи, Прайс, Натан Д., Прусинкевич, Пшемыслав, Раила, Дэвид, Шекар, Рэйчел Г., Шривастава, Стути, Шукла, Дивакар, Шринивасан, Венкатраман, Ститт, Марк, Терк, Мэтью Дж., Войт, Эберхард О., Ван, Ю, Инь, Синью, Чжу, Синь Гуан, 2017 г.
Полногеномное ассоциативное картирование и агрономическое влияние архитектуры корня вигны
Теоретическая и прикладная генетика, Берридж, Джеймс Д., Шнайдер, Ханна М., Хюин, Бао Лам, Робертс, Филип А., Бакш, Александр, Линч, Джонатан Пол, 2017
ДЕФИЦИТ NPK МОДУЛИРУЕТ ОКСИДАТИВНЫЙ СТРЕСС У РАСТЕНИЙ
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МАКРОНУТРИЕНТОВ РАСТЕНИЙ: МОЛЕКУЛЯРНЫЕ И ГЕНОМИЧЕСКИЕ ПЕРСПЕКТИВЫ НА РАСТЕНИЯХ, Чжан, Чжиюн, Линч, Джонатан, Чжан, Баохун, Ван, 2017
Функциональные последствия старения коры корня корня для захвата ресурсов почвы
Plant Soil, Schneider, Hannah, Lynch, Jonathan, 2017
Генетическая изменчивость фосфорных ответов фенотипов корня риса
Rice, Vejchasarn, Phanchita, Lynch, Jonathan P.
, Браун, Кэтлин М., 2016
Температура и свет вызывают накопление марганца и стресс в сельскохозяйственных культурах трех основных семейств растений
Экологическая и экспериментальная ботаника, Фернандо, Дениз Р., Морони, Серджио Дж., Скотт, Брендан Дж., Коньерс, Марк К., Линч, Джонатан П. , Маршалл, Алан Т., 2016 г.
Влияние углов роста осевых корней на усвоение азота кукурузой зависит от условий окружающей среды
Annals of Botany, Dathe, A., Postma, J. A., Postma-Blaauw, M.Б., Линч, Джонатан Пол, 2016 г.
Уменьшение числа корневых корней улучшает усвоение воды при стрессе дефицита воды у кукурузы (Zea mays L.)
Journal of Experimental Botany, Gao, Yingzhi, Lynch, Jonathan P., 2016
Характер распределения питательных веществ в листьях симпатрических видов клена отражает контрастную чувствительность к избытку марганца
PLoS One, Fernando, Denise R., Marshall, Alan T., Lynch, Jonathan Paul, 2016
Legume shovelomics
Field Crops Research, Burridge, James, Jochua, Celestina N.
, Бакш, Александр, Линч, Джонатан П., 2016
Пространственно-временные изменения кинетики поглощения нитратов в корневой системе кукурузы (Zea mays L.) связаны с повышенным поглощением нитратов и взаимодействием с архитектурными фенами.
Journal of Experimental Botany, York, Larry M., Silberbush, Moshe, Lynch, Jonathan P., 2016 г.
Plants in silico: почему, почему сейчас и что? — интегративная платформа для исследования системной биологии растений.
Растение, клетка и окружающая среда, Чжу, Икс, Линч, Джонатан, ЛеБауэр, Д, Миллар, А, Ститт, М, Лонг, С, 2016
Цифровая визуализация корневых признаков (DIRT)
Plant Methods, Das, Abhiram, Schneider, Hannah, Burridge, James, Ascanio, Ana Karine Martinez, Wojciechowski, Tobias, Topp, Christopher N., Линч, Джонатан П., Вайц, Джошуа С., Бакш, Александр, 2015
Интенсивное полевое фенотипирование корневых крон кукурузы (Zea mays L.) позволяет идентифицировать фены и интеграцию фенов, связанные с ростом растений и поглощением азота.
Journal of Experimental Botany, York, Larry M., Lynch, Jonathan P., 2015
Уменьшение плотности боковых корней улучшает засухоустойчивость кукурузы.
Plant Physiology, Zhan, Ai, Schneider, Hannah, Lynch, Jonathan P., 2015
Анатомические фены корня предсказывают способность проникновения корней и биомеханические свойства кукурузы (Zea Mays)
Journal of Experimental Botany, Chimungu, Joseph G., Loades, Кеннет В., Линч, Джонатан П., 2015
Синергизм фена между длиной корневого волоска и углом роста базального корня для поглощения фосфора
Физиология растений, Мигель, Магальяэс Амаде, Постма, Йоханнес Ауке, Линч, Джонатан Пол, 2015
Эволюция архитектурных и анатомических фенов корней кукурузы США (Zea mays L.) за последние 100 лет соответствует повышенной устойчивости к азотному стрессу
Journal of Experimental Botany, York, Larry M., Galindo-Castañeda, Tania, Schussler, Jeffrey R., Линч, Джонатан П., 2015
Уменьшение частоты бокового ветвления корней улучшает улавливание азота из почв с низким содержанием азота кукурузы.
Журнал экспериментальной ботаники, Жан, Ай, Линч, Джонатан П., 2015
Реакция на повышенный уровень CO 2 в умеренном климате C 3 трава Festuca arundinaceae в широком диапазоне почв
Frontiers in Plant Science, Nord, Eric A., Jaramillo, Raúl E., Lynch, Jonathan P., 2015
Полезность корневой корковой аэренхимы в условиях ограниченного количества воды у тропической кукурузы (Zea mays L.)
Field Crops Research, Chimungu, Joseph G., Maliro, Moses F.A., Nalivata, Patson C., Kanyama-Phiri, George, Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2015 г.
Картирование QTL и фенотипические вариации анатомических признаков корня кукурузы (Zea mays L.)
Theoretical And Applied Genetics, Burton, Amy L., Johnson, James, Foerster, Jillian, Hanlon, Meredith T., Kaeppler, Shawn M., Lynch , Джонатан П., Браун, Кэтлин М., 2015
Лопаткоулавливатель нового поколения
Plant and Soil, Colombi, Tino, Kirchgessner, Norbert, Le Marié, Chantal Andrée, York, Larry Matthew, Lynch, Jonathan P.
, Хунд, Андреас, 2015
Уменьшение числа корневых кортикальных клеток улучшает устойчивость кукурузы к засухе.
Plant Physiology, Chimungu, Joseph G., Brown, Kathleen M., Lynch, Jonathan P., 2014
Большой размер корковых клеток корня улучшает засухоустойчивость кукурузы.
Plant Physiology, Chimungu, Joseph G., Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2014
Корневой сбор дает преимущество в урожайности, зависящее от комплементарности ниш, в древней поликультуре «три сестры» (кукуруза / фасоль / тыква)
Annals of Botany, Zhang, Chaochun, Postma, Johannes A., Йорк, Ларри М., Линч, Джонатан П., 2014
Низкое число корней в кроне увеличивает усвоение азота из почв с низким содержанием азота кукурузы.
Plant Physiology, Saengwilai, Patompong, Tian, Xiaoli, Lynch, Jonathan Paul, 2014
Оптимальная плотность боковых корней кукурузы зависит от наличия азота и фосфора.
Физиология растений, Postma, Йоханнес Ауке, Дате, Аннетт, Линч, Джонатан Пол, 2014
Высокопроизводительное полевое фенотипирование корней сельскохозяйственных культур на основе изображений
Plant Physiology, Bucksch, Alexander, Burridge, James, York, Larry M.
, Дас, Абхирам, Норд, Эрик, Вайц, Джошуа С., Линч, Джонатан П., 2014 г.
Кортикальная аэренхима корня увеличивает усвоение азота из почв с низким содержанием азота кукурузы
Plant Physiology, Saengwilai, Patompong, Nord, Eric A., Chimungu, Joseph G., Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2014
Картирование QTL и фенотипические вариации архитектурных признаков корня кукурузы (Zea mays L.)
Theoretical And Applied Genetics, Burton, Amy L., Johnson, James M., Foerster, Jillian M., Хирш, Кэндис Н., Бьюэлл, К. Р., Хэнлон, Мередит Т., Кэпплер, Шон М., Браун, Кэтлин М., Линч, Джонатан П., 2014
Кортикальная аэренхима корня подавляет радиальный транспорт питательных веществ у кукурузы (Zea mays)
Annals of Botany, Hu, Bo, Henry, Amelia, Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2014
Число оборотов базального корня
Annals of Botany, Miguel, M.A., Widrig, A., Vieira, R.F., Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2013
Интеграция корневых фенов для получения почвенных ресурсов
Frontiers in Plant Science, York, Larry M.
, Норд, Эрик А., Линч, Джонатан П., 2013
Корковая нагрузка корня влияет на засухоустойчивость кукурузы
Annals of Botany, Jaramillo, Raúl E., Nord, Eric A., Chimungu, Joseph G., Brown, Kathleen M., Lynch, Jonathan P., 2013
Пространственное распределение и фенотипические вариации аэренхимы корневой коры кукурузы (Zea mays L.)
Plant and Soil, Burton, Amy L., Lynch, Jonathan Paul, Brown, Kathleen Marie, 2013
Влияние землепользования на эрозию и накопление углерода в водоразделе Рио-Чимбо, Эквадор
Plant and Soil, Henry, A., Мабит, Л., Харамилло, Р. Э., Картахена, Ю., Линч, Дж. П., 2013
Фенотипическое разнообразие анатомических и архитектурных особенностей корней у видов Zea
Crop Science, Burton, Amy L., Brown, Kathleen M., Lynch, Jonathan P., 2013
Углы роста корней кукурузы становятся более крутыми в условиях низкого содержания азота
Field Crops Research, Trachsel, S., Kaeppler, S.M., Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2013
RootScan
Plant and Soil, Бертон, Эми Л.
, Уильямс, Майкл, Линч, Джонатан П., Браун, Кэтлин М., 2012
Комплементарность корневой архитектуры для поглощения питательных веществ в древних поликультурах кукурузы / бобов и кукурузы / бобов / кабачков.
Анналы ботаники, Postma, Йоханнес А., Линч, Джонатан П., 2012 г.
Новые корни для сельского хозяйства
Философские труды Королевского общества B: биологические науки, Линч, Джонатан Пол, Браун, Кэтлин Мари, 2012 г.
Анализ развития боковых корней
Plant Cell, de Smet, Ive, White, Philip J., Glyn Bengough, A., Дюпюи, Лайонел, Паризо, Борис, Казимиро, Ильда, Хейдстра, Ренце, Ласковски, Марта, Лепетит, Марк, Хоххолдингер, Франк, Дрей, Ксавье, Жан, Ханма, Бродли, Мартин Р., Перет, Бенджамин, Хаммонд, Джон П., Фукаки, Хидехиро, Муни, Саша, Линч, Джонатан П., Накри, Филипп, Шурр, Ульрих, Лаплаз, Лоран, Бенфей, Филип, Бекман, Том, Беннетта, Малкольм, 2012 г.
Стратегии и агрономические вмешательства для повышения эффективности использования фосфора в сельскохозяйственных системах
Plant and Soil, Simpson, Richard J.
, Оберсон, Астрид, Калвенор, Ричард А., Райан, Меган Х., Венеклаас, Эрик Дж., Ламберс, Ханс, Линч, Джонатан П., Райан, Питер Р., Делхайз, Эммануэль, Смит, Ф. Эндрю, Смит , Салли Э., Харви, Пол Р., Ричардсон, Алан Э., 2011 г.
Растительные и микробные стратегии для повышения эффективности использования фосфора в сельском хозяйстве
Растения и почвы, Ричардсон, Алан Э., Линч, Джонатан П., Райан, Питер Р., Дельхейз, Эммануэль, Смит, Ф. Эндрю, Смит, Салли Э., Харви, Пол Р., Райан, Меган Х., Венеклаас, Эрик Дж., Ламберс, Ганс, Оберсон, Астрид, Калвенор, Ричард А., Симпсон, Ричард Дж., 2011
Фенотипическая изменчивость и моделирование корневой структуры дикого Lupinus angustifolius genotypes
Plant and Soil, Chen, Ying Long, Dunbabin, Vanessa M., Postma, Johannes A., Diggle, Art J., Palta, Jairo A., Lynch, Jonathan P ., Siddique, Kadambot HM, Rengel, Zed, 2011 г.
Оптимизация репродуктивной фенологии в мире с двумя ресурсами
Annals of Botany, Nord, Eric A.
, Shea, Katriona, Lynch, Jonathan P., 2011 г.
Корневые фены для углубленного изучения почвы и получения фосфора
Plant Physiology, Lynch, Jonathan P., 2011
Кортикальная аэренхима корней усиливает рост кукурузы на почвах с недостаточной доступностью азота, фосфора и калия
Физиология растений, Postma, Йоханнес Аук, Линч, Джонатан Пол, 2011
Генотипическая изменчивость корневых признаков кукурузы (Zea mays L.) с плато Пурхепеча при контрастной доступности фосфора
Field Crops Research, Bayuelo-Jiménez, Jeannette S., Галлардо-Вальдес, Марин, Перес-Деселис, Вероника А., Магдалено-Армас, Лурдес, Очоа, Иван, Линч, Джонатан Пол, 2011 г.
Shovelomics
Plant and Soil, Trachsel, Samuel, Kaeppler, Shawn M., Brown, Kathleen Marie, Lynch, Jonathan Paul, 2011 г.
Теоретические доказательства функционального преимущества аэренхимы корневой коры в почвах с низким содержанием фосфора
Annals of Botany, Postma, Johannes A., Lynch, Jonathan P.
, 2011
Ответы корней на соседние растения в фасоли обыкновенной опосредуются концентрацией питательных веществ, а не самопознанием / несамостоятельностью
Functional Plant Biology, Nord, Eric A., Чжан, Чаочунь, Линч, Джонатан П., 2011 г.
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или уточнить у системного администратора.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Использование центральной догмы для строгого многоуровневого контроля экспрессии генов
Введение
С момента разработки первых индуцибельных систем в начале 1980-х годов 1 появилась возможность динамически контролировать экспрессию генов с помощью малых молекул 2 , свет 3,4 и другие сигналы 5 произвел революцию в биотехнологии. От контроля сдвигов между стадиями роста клеток и производства белка во время крупномасштабных ферментаций 6 до детальной характеристики генетических частей и схем 7 , контроль экспрессии генов лежит в основе огромного разнообразия приложений.Однако, хотя переключение экспрессии гена «включено» или «выключено» концептуально просто, гены редко имеют такие дискретные состояния или когда-либо полностью заглушаются. Стохастические эффекты 8,9 и неплотная экспрессия широко распространены и потенциально важны для адаптации в естественных системах, но могут нанести ущерб инженерным системам, в которых гены токсичны для хозяина или ответы высокочувствительны и легко запускаются неизбежными колебаниями 10,11 .
Ранние системы контроля экспрессии генов основывались на перепрофилировании нативных регуляторных компонентов, таких как факторы транскрипции.Одной из наиболее широко используемых является система P tac 1 . Он состоит из конститутивно экспрессируемого репрессора LacI, который может образовывать димеры и тетрамеры для прочного связывания операторских сайтов в промоторной последовательности P tac и стерически блокировать инициацию РНК-полимеразы (РНКП). LacI чувствителен к изопропил-β-d-1-тиогалактопиранозиду (IPTG), и при высоких концентрациях ДНК-связывающая активность LacI отменяется. Это снимает репрессию P tac и приводит к сильной транскрипции генов, регулируемых этим промотором.Хотя в большинстве случаев такие системы предлагают сильную репрессию, поскольку такие регуляторные системы сосредоточены на одной стадии во время синтеза белка (т.е. транскрипции), они уязвимы к колебаниям в продукции регуляторов и стохастической природе биохимических реакций во время экспрессии генов 9 .
За последнее десятилетие биологи-синтетики разработали более совершенные методы контроля экспрессии генов. К ним относятся сконструированные регуляторы на основе ДНК-связывающих белков, таких как цинковые пальцы 12 , TALEN 13 и CRISPRi 14 , взаимодействия РНК-РНК 15–17 , посттранскрипционные / трансляционные процессы, такие как РНК и деградация белка 18 , а также с использованием направленной эволюции для оптимизации существующих индуцируемых систем 19 .Это предлагает множество вариантов более строгой регуляции экспрессии генов посредством сочетания нескольких форм регуляции (например, влияющих как на транскрипцию, так и на трансляцию гена) для снижения нежелательной экспрессии и повышения устойчивости системы к отказу компонентов. Однако на сегодняшний день реализовано несколько примеров такого многоуровневого регулирования 20,21 . Это привело к нечеткой картине того, как можно достичь наилучшего строгого многоуровневого контроля, и к компромиссам, которые существуют между производительностью, сложностью регулирования и нагрузкой на сотовую связь при проектировании этих систем.
Здесь мы решаем эту проблему, систематически изучая совместное использование регуляторов транскрипции и трансляции для строгого контроля экспрессии белков. Используя сочетание математического моделирования и комбинаторной генетической сборки, мы можем проектировать, создавать и тестировать множество синтетических многоуровневых контроллеров (MLC) и выяснять относительную производительность каждого из них. Все эти контроллеры реализуют регуляторный мотив когерентного контура прямой связи типа 1 (C1-FFL) (, рис. 1A, ), который обычно встречается в естественных генетических системах и, как известно, обеспечивает более строгий контроль выходных данных, но редко используется при проектировании. новые системы экспрессии 22 .Мы показываем, как MLC предлагают преимущества для многих приложений, охватывающих строгий контроль экспрессии белков до точного распространения информации в клетке 23,24 , и демонстрируем, как применение современных инструментов синтетической биологии даже к простым регуляторным системам может предложить пути к точному и надежный контроль биологических систем.
Рисунок 1: Строгий контроль экспрессии белка посредством многоуровневой регуляции генов.( A ) Две возможные схемы регуляции для контроля экспрессии представляющего интерес гена (GOI): 1.управление с использованием одного регулятора ( L1 ) и 2. многоуровневое управление с использованием двух отдельных регуляторов ( L1 и L2 ), соединенных в виде когерентной прямой петли типа 1 (C1-FFL). ( B ) Схема генетической реализации одноуровневого контроллера (SLC), который использует только регуляцию транскрипции (красные линии). Вход (например, малая молекула) модулирует активность промотора P L1 и продукцию GOI. ( C ) Схема генетической реализации многоуровневого контроллера (MLC), который использует регуляцию как транскрипции (красные линии), так и трансляции (синяя линия).Входной сигнал (например, малая молекула) модулирует активность двух промоторов P L1 , а внутренний регулятор L2 активирует трансляцию транскриптов GOI, чтобы в конечном итоге продуцировать выходной белок. ( D ) Установившиеся функции отклика на основе математических моделей SLC и MLC. ( E ) Моделирование динамической модели SLC и MLC и их реакции на различные формы временных входных данных (слева направо): дельта-функции (P L1 активность = 2 RNAP / мин в течение 1 мин на 100 мин и 150 мин), пульса (P L1 активность = 5 RNAP / мин от 100 до 130 мин) и ступенчатой функции (P L1 активность = 5 RNAP / мин от 100 минут и далее).Активность обоих промоторов P L1 в MLC считается идентичной. ( F ) Моделирование динамической модели SLC и MLC, демонстрирующее подавление внутреннего шума промотора с помощью MLC. Два идентичных промотора P , , L1, , для регулятора L2 и GOI отдельно управляются независимыми и биологически реалистичными профилями взрывной транскрипционной активности ( Методы ).
Результаты
Строгий контроль экспрессии генов путем использования центральной догмы
В большинстве синтетических генетических схем контроль экспрессии генов достигается за счет использования единственного типа регуляции ( Рисунок 1A ), с преимущественно контролем транскрипции использовал.Хотя этот тип одноуровневого контроллера (SLC; , рис. 1B, ) часто бывает достаточным для многих приложений, центральная догма, естественно, поддается более строгому многоуровневому регулированию, при котором транскрипция и трансляция контролируются одновременно (например, с помощью факторов транскрипции и Переключатели трансляции на основе РНК). Такие многоуровневые контроллеры (MLC; Рисунок 1C ) можно обобщить с помощью генетического дизайна, который состоит из гена L1 , кодирующего регулятор транскрипции уровня 1 с родственным промотором P L1 и гена L2 . кодирование регулятора трансляции уровня 2.Как L2 , так и интересующий ген (GOI) отдельно транскрибируются промоторами P L1 , и продукт L2 активирует трансляцию транскрипта GOI. Этот MLC инкапсулирует когерентный контур прямой связи типа 1 (C1-FFL), в котором как L1 , так и L2 необходимы для создания GOI.
Чтобы изучить возможные преимущества этого регуляторного мотива, мы разработали математические модели для определения того, как скорость продуцирования GOI изменялась в ответ на различные концентрации входного индуктора для конструкций SLC и MLC ( Дополнительное примечание 1 ; Дополнительные данные 1 ).Мы создали функции ответа в установившемся состоянии путем моделирования моделей с использованием биологически реалистичных параметров ( Дополнительная таблица 1 ) в диапазоне различных входных концентраций IPTG. Как и ожидалось, выходная производительность имела сигмоидальную форму, при этом оба контроллера достигли почти одинаковых максимальных показателей при высоких входных концентрациях IPTG (, фиг. 1D, ). Основное отличие заключалось в том, что конструкция MLC показывала в 50 раз меньший выход, чем прямой контроллер при низких концентрациях IPTG, что приводило к значительному снижению базальной экспрессии при отсутствии входных данных (, рис. 1D, ).Это привело к тому, что конструкция MLC имела как увеличенный динамический диапазон, так и кратное изменение между состояниями «выключено» и «включено» по сравнению с конструкцией SLC.
Таблица 1: Сводная информация о производительности одно- и многоуровневых контроллеров in vivo aМы также смоделировали скорость продукции выходного белка для обеих моделей при воздействии ряда динамических входных сигналов. К ним относятся дельта-функции, а также импульсные и ступенчатые входы (, рис. 1E, ). Моделирование показало, что оба типа контроллеров отображали практически идентичные выходные отклики как для импульсных, так и для ступенчатых входов, только с небольшим снижением скорости выходной экспрессии для MLC, которая соответствовала его более низкому базальному уровню экспрессии.Однако наблюдались существенные различия в ответах на ввод дельта-функции. В то время как SLC приводил к появлению импульсов умеренного размера на выходе, конструкция MLC полностью подавляла всю активность вывода, наблюдая лишь крошечные колебания в скорости экспрессии вывода. Поведение MLC возникло из-за необходимости экспрессии как L1 , так и L2 до достаточно высоких уровней для активации экспрессии GOI. Коротких импульсов выражения, вызванных вводом дельта-функции, было недостаточно, чтобы вызвать это переключение, и позволили MLC эффективно отфильтровать эти переходные события на своем входе.
Способность отфильтровывать быстрые колебания особенно важна для строгого контроля в системах, в которых промоторы входа демонстрируют высокий уровень собственного шума. В таких сценариях уровни белка могут значительно различаться в популяции клеток 8 из-за часто прерывистой природы транскрипции генов. Это обычно наблюдается для слабых промоторов, где преобладает собственный шум. Вместо того, чтобы активность слабого промотора была равномерно низкой, он вместо этого демонстрирует короткие всплески сильной активности, разделенные длительными периодами неактивности 8,25 .В популяции это в среднем составляет низкий общий уровень экспрессии, но между клетками присутствует большая вариабельность. Как видно для входов дельта-функции, такие входные профили, управляющие SLC, приведут к большим колебаниям выходных данных. Однако, поскольку внутренний шум промотора специфичен для отдельного промотора и не коррелирован между несколькими идентичными версиями промотора в конструкции, конструкция MLC, содержащая две копии входного промотора P L1 , должна обнаружить, что всплеск экспрессии из очень маловероятно, что один промотор P L1 произойдет одновременно с импульсом от другого.Следовательно, MLC подавляет шум на выходе.
Чтобы проверить эту гипотезу, мы сгенерировали точные профили активности промотора временного ряда на основе модели с двумя состояниями 25 , где средняя продолжительность времени, в течение которого промотор находился в активном состоянии и выключенном состоянии молчания (Δ t ON и Δ t OFF соответственно) составляли ⟨Δ t ON ⟩ = 6 мин и ⟨Δ t OFF ⟩ = 37 мин. Эти значения были взяты из предыдущих экспериментальных измерений в E.coli 25 . Мы также установили активность промотора P L1 во «включенном» состоянии на биологически реалистичном уровне 0,25 RNAP / мин. Независимые временные ряды были созданы для каждого промотора P L1 в MLC, и только один из них был использован для SLC, где присутствует только один промотор P L1 . Затем эти профили были введены в наши существующие динамические модели и смоделированы отклики систем. Мы обнаружили, что производительность на выходе для SLC значительно увеличилась, особенно когда ввод состоял из более длительных всплесков активности или нескольких всплесков в короткой последовательности (, рис. 1F, ).Для сравнения, MLC полностью подавляет все выходные сигналы, что делает его отличным фильтром внутреннего шума промотора.
Генетическая матрица для изучения многоуровневой регуляции генов
Существует много способов биологической реализации MLC. Кроме того, при реализации такого контроллера часто необходимо переключать используемый вход и внутренние регуляторы таким образом, чтобы несколько контроллеров можно было использовать одновременно в одной ячейке. Чтобы удовлетворить эти требования, мы разработали генетический шаблон из 8 частей и набор инструментов для быстрой комбинаторной сборки MLC (, рис. 2A, ).Конструкция обеспечивает как одноуровневую, так и многоуровневую регуляцию, имеет возможность вводить белковые теги для дальнейшего посттрансляционного контроля GOI (например, посредством сигнализируемой деградации) и структурирована так, чтобы минимизировать вероятность транскрипционного чтения, чтобы вызвать нежелательную экспрессию компонента. части. Набор инструментов включает 8 типов частичной плазмиды (pA – pH) и плазмиду остова (pMLC-BB1), в которую вставлена окончательная конструкция MLC ( дополнительных данных 2 ). Сборка выполняется с использованием стандартной реакции Golden Gate с одним горшком с отдельными блоками, предназначенными для использования выступов 4 п.н. с минимальной перекрестной реактивностью для обеспечения правильного и эффективного лигирования частей 26 .Кроме того, быстрый скрининг успешных вставок возможен за счет выпадения единицы экспрессии оранжевого флуоресцентного белка ( из p ) 27 ( Дополнительное примечание 2 ).
Рисунок 2: Комбинаторная сборка контроллеров экспрессии генов.( A ) Краткое изложение генетической матрицы из 8 частей, используемой для систематического изучения прямой и многоуровневой регуляции генов. Выступы размером 4 п.н., используемые для сборки Golden Gate, показаны серым цветом в соответствующих местах соединения.Доступные генетические элементы перечислены под каждым соответствующим типом детали (A – H). ( B ) Набор инструментов MLC содержит набор плазмид, которые могут быть объединены с использованием сборки Golden Gate для создания различных прямых и многоуровневых контроллеров ( Дополнительный рисунок 3 ). ( C ) Фактор транскрипции lacI , реагирующий на IPTG, используемый для уровня 1 ( L1 ) регуляторного контроля транскрипции. ( D ) Регулятор перемещения Toehold Switch (THS), используемый для управления уровнем 2 ( L2 ).( E ) Регулятор транскрипции малой РНК, активирующей транскрипцию (STAR), используемый для контроля L2 . ( F ) Двойной контроль (DC), регулятор транскрипции и трансляции, используемый для контроля L2 .
Используя этот набор инструментов, мы стремились сравнить поведение in vivo различных конструкций SLC и MLC, уделяя особое внимание различным механизмам, которые можно использовать для управления L2 , и их влиянию на общую производительность.Для конструкции SLC мы выбрали широко используемую систему P tac , представленную ранее ( Рисунок 2C ). Чтобы упростить сравнения, мы также использовали систему P tac для контроля L1 во всех конструкциях MLC и объединили ее с тремя различными регуляторами L2 на основе РНК. К ним относятся переключатель опоры (THS; Рисунок 2D ) 17,28 , небольшая РНК, активирующая транскрипцию (STAR; Рисунок 2E ) 29 , и двойная система управления (DC; Рисунок 2F ) 21 .
Регулятор THS кодирует структурный компонент, за которым следует сайт связывания рибосомы (RBS), который используется для управления трансляцией GOI ( Рисунок 2D ). Структурная область предназначена для образования прочной шпильки, которая при транскрипции препятствует способности рибосом связывать RBS и, таким образом, ингибирует трансляцию. Трансляция активируется экспрессией триггера комплементарной малой РНК (мРНК), который гибридизуется с короткой неструктурированной областью THS, что вызывает нарушение его вторичной структуры.Это конформационное изменение позволяет рибосомам связывать RBS и трансляции GOI продолжаться. THS были выбраны потому, что они обеспечивают сильное подавление трансляции, могут быть разработаны с помощью вычислений и существуют большие библиотеки проектов с минимальными перекрестными помехами при совместном использовании 17,28 .
В отличие от THS, регулятор STAR работает на уровне транскрипции. Мишень STAR помещается перед RBS в 5 ’нетранслируемой области (UTR) GOI (, фиг. 2E, ).При транскрибировании это образует внутренний терминатор и подавляет экспрессию GOI. Активация достигается за счет экспрессии РНК STAR, которая взаимодействует с мишенью, предотвращает образование терминатора и, таким образом, обеспечивает экспрессию нижележащего GOI. Подобно THS, STAR, как было показано, предлагают сильную репрессию, и существуют большие библиотеки ортогональных вариантов 16,29 .
Наконец, регулятор постоянного тока сочетает в себе контроль транскрипции и трансляции путем модификации аттенюатора pT181 21 .Мишень DC помещается в 5 ’UTR GOI и кодирует внутренний терминатор, который включает RBS ( фиг. 2F, ). При транскрипции внутренний терминатор не только останавливает транскрипцию, но и подавляет трансляцию, заставляя RBS образовывать сильную вторичную структуру РНК, делая ее недоступной для рибосомы. Активация достигается за счет экспрессии STAR, который взаимодействует с мишенью, как предотвращая образование терминатора, так и вызывая конформационные изменения в структуре РНК, которые делают RBS доступным для инициации трансляции.Регулятор постоянного тока был выбран из-за этого комбинированного регулирующего действия, которое, как было показано, вызывает сильную репрессию 21 . Однако на сегодняшний день создан только один из этих регуляторов, что ограничивает применение в будущем.
Было синтезированочастей ДНК, кодирующих каждую из этих регуляторных систем, и наш инструментарий использован для сборки SLC и трех конструкций MLC. Зеленый флуоресцентный белок Superfolder ( gfp ) был выбран в качестве GOI для измерения выходной экспрессии в отдельных клетках с использованием проточной цитометрии.
Сравнение производительности контроллеров
Чтобы охарактеризовать характеристики контроллеров, мы трансформировали клеток Escherichia coli каждой конструкцией и измерили флуоресценцию GFP с использованием проточной цитометрии для входных состояний «выключено» и «включено». Поскольку P tac использовали в качестве входных данных для всех дизайнов, это соответствовало выращиванию клеток в 0 или 1 мМ IPTG, соответственно ( методы ). Данные этих экспериментов затем использовались для расчета динамического диапазона и кратного изменения выходной флуоресценции GFP ( таблица 1 ; дополнительная фигура 1 ).
Мы обнаружили четкое разделение между выходными состояниями для всех дизайнов с небольшими вариациями между биологическими повторами ( Рисунки 3A ). Все MLC (THS, STAR и DC) достигли более высоких уровней экспрессии, чем SLC P tac , а конструкции THS и DC достигли больших> 1000-кратных изменений между выходными состояниями. Примечательно, что в то время как дизайн STAR достиг гораздо более высокого состояния «включено», чем дизайн P tac , высокие уровни базальной (протекающей) экспрессии STAR при отсутствии ввода привели к уменьшению кратного изменения на 43% (таблица 1 ).
Рисунок 3: Сравнение производительности одно- и многоуровневых контроллеров in vivo .( A ) Общая флуоресценция GFP для входных состояний «выключено» и «включено» (0 и 1 мМ IPTG, соответственно). Точки показывают три биологические копии для каждого контроллера и состояния (черные кружки, P tac ; синие квадраты, THS; красные ромбы, STAR; оранжевые кресты, DC). Черная пунктирная линия обозначает среднюю флуоресценцию аутофлуоресценции клеток (а.о.), контроли, не содержащие плазмиды, с серой заштрихованной областью, показывающей ± 1 стандартное отклонение 11 биологических повторов.Флуоресценция приведена в калиброванных молекулах эквивалентных единиц флуоресцеина (MEFL). ( B ) Распределение общей флуоресценции GFP при проточной цитометрии для состояний «выключено» (линия) и «включено» (заштриховано). Контроли автофлуоресценции (а.о.) клеток, не содержащие контроллера, показаны черной пунктирной линией и светло-серыми заполненными распределениями. ( C ) Время удвоения клеток, содержащих прямые и многоуровневые контроллеры для различных концентраций IPTG (столбцы слева направо для каждого дизайна: 0, 0.1, 1, 10 мМ IPTG). ( D ) Время задержки, рассчитанное как время достижения ОП 600 = 0,15 после инокуляции клеток, несущих контроллеры для различных концентраций IPTG (столбцы слева направо для каждого дизайна: 0, 0,1, 1, 10 мМ IPTG) .
Проблемой при вычислении этих показателей (особенно кратного изменения) является возможность точно определить очень низкий уровень выходной флуоресценции GFP, который близок или идентичен автофлуоресценции клеток. Чтобы лучше понять этот аспект, мы измерили аутофлуоресценцию GFP нетрансформированного E.coli , выполняя 11 биологических повторов для оценки распределения флуоресценции, которое можно использовать в качестве приблизительного предела обнаружения. Наложив среднее и стандартное отклонение аутофлуоресценции клеток на наши результаты (, рис. 3A, , пунктирная линия и заштрихованная область серого цвета), мы обнаружили, что состояния «выключено» для моделей P tac , THS и DC упали в этой области и очень близко к среднему, что позволяет предположить, что у них практически нет утечки выражения вообще.
Другая трудность при сравнении производительности контроллеров заключается в необходимости учитывать большие различия в максимальных скоростях экспрессии (например, более чем 60-кратная разница между P tac и конструкциями THS для состояния «включено»). Следует отметить, что один и тот же промотор P tac используется в качестве входных данных для всех наших дизайнов и что он включает расположенный выше спейсерный элемент на 15 п.н., чтобы изолировать его функцию от контекстных эффектов, возникающих из-за различных соседних последовательностей, присутствующих в каждом дизайне. 24,30 .Поэтому разумно ожидать, что динамический диапазон транскрипционной активности входного промотора будет одинаковым для каждого контроллера, с различиями в скорости экспрессии выходного белка, непосредственно связанными с сайтами связывания рибосом разной силы, обнаруженными в каждом регуляторе L2 или конструкции SLC. Учитывая эти различия и для обеспечения объективного сравнения, мы рассчитали относительный базальный уровень экспрессии GFP каждого контроллера в процентах от его максимального выхода (, таблица 1, ).Это показало, что THS работает лучше всего, показывая 25-кратное снижение относительной базальной экспрессии по сравнению с P tac SLC с 0,02% относительной базальной экспрессией по сравнению с 0,5%, соответственно. Дизайн DC также показал хорошие результаты с относительной базальной экспрессией 0,04%, в то время как STAR MLC показал наибольшую относительную базальную экспрессию 1,45%, что почти в 3 раза больше, чем у P tac SLC.
Хотя сравнение средних уровней экспрессии между состояниями «включено» и «выключено» полезно, они не способны уловить роль межклеточной изменчивости, присущей экспрессии всех генов 9 .Такие вариации имеют решающее значение при оценке эффективности систем строгой экспрессии, потому что даже при том, что средние выходные состояния могут быть достаточно разделены, чтобы их можно было различить, межклеточная вариация в популяции может приводить к перекрытиям в выходных распределениях. Ячейки, попадающие в это перекрытие, невозможно классифицировать, в результате чего некоторые ячейки остаются в неопределенном состоянии. Инженеры разработали меры, помогающие охарактеризовать силу и качество сигнала (то есть способность различать выходные состояния «включено» и «выключено») с помощью отношения сигнал / шум (SNR), обычно используемого в других областях, таких как электроника.SNR также недавно был адаптирован для использования при изучении сконструированных генетических систем, что упрощает понимание того, как качество сигналов в цепи сохраняется или ухудшается, когда они проходят через различные генетические устройства 23 .
Используя распределения проточной цитометрии, мы рассчитали SNR для каждого контроллера в децибелах (дБ) ( Таблица 1 ; Методы ). Мы обнаружили, что P tac SLC показал худшие результаты при низком SNR, равном 0.2 дБ, что соответствует сигналу, едва превышающему шум. Это было очевидно для распределений проточной цитометрии, где наблюдалось значительное перекрытие в состояниях «включено» и «выключено» (, рис. 3B, ). Все MLC работали лучше, когда THS достигал SNR> 10 дБ. Эта улучшенная производительность была также очевидна из данных проточной цитометрии с четкими промежутками разной величины между выходными распределениями «включено» и «выключено» (, фиг. 3B, ). Это более четкое разделение между ячейками в состоянии «включено» и «выключено» сделало бы эти части идеальными для схем генетической логики, гарантируя чистое распространение сигналов.
Бремя контроллеров на клетке-хозяине
Растет осознание важности учета нагрузки, которую инженерные генетические части и цепи возлагают на их клетку-хозяина 31 . Внедрение генетической конструкции, которая секвестрирует большие количества общих клеточных ресурсов, таких как рибосомы, или сильно влияет на основные метаболические потоки, может привести к снижению темпов роста и вызвать стрессовые реакции, которые нарушают функцию сконструированных генетических частей 32–37 .При разработке MLC мы целенаправленно выбрали регуляторы на основе РНК, поскольку предыдущие результаты предполагают, что они накладывают небольшую метаболическую нагрузку на клетку 38 . Однако, чтобы экспериментально проверить это на наших клетках, мы построили кривые роста для всех конструкций SLC и MLC ( Дополнительный рисунок 2 ). Поскольку метаболические потребности контроллеров будут варьироваться в зависимости от концентрации присутствующего индуктора (из-за различных уровней продуцируемой мРНК или STAR), клетки подвергались воздействию 4 различных концентраций IPTG (0, 0.1, 1, 10 мМ), охватывающий состояния «выключено» и «включено» контроллеров.
По этим кривым роста мы оценили время удвоения во время фазы экспоненциального роста ( Методы ). Мы обнаружили, что SLC и все MLC показали одинаковое время удвоения ~ 70 мин ( Рисунок 3C ). Кроме того, мы наблюдали небольшое уменьшение времени удвоения всех контроллеров по мере увеличения концентрации IPTG. Эта тенденция противоречит здравому смыслу, учитывая, что увеличение концентрации IPTG вызовет экспрессию GOI и любых L2 регуляторов, увеличивая нагрузку на клетку.Однако известно, что IPTG может оказывать неожиданное влияние на физиологию клетки 39 и вызывать изменения в стабильности плазмиды 40 , что может привести к снижению общей нагрузки из-за меньшего количества копий контрольной плазмиды или более эффективного использования доступных питательных веществ посредством клетка.
Мы также измерили время задержки после инокуляции в свежую среду до того, как клетки начали экспоненциальный рост ( Methods ). Мы обнаружили различия между многими контроллерами с временем задержки ~ 165 мин для конструкций P tac и THS, более коротким временем задержки 88 мин для конструкции постоянного тока и значительно более длительным временем задержки 373 мин для дизайн STAR ( Рисунок 3D ).Более внимательное изучение кривых роста показало, что конструкция DC имела постоянно более высокую начальную плотность клеток (оптическая плотность при 600 нм 0,07 по сравнению с 0,04 для конструкции THS), что могло объяснить более короткую лаг-фазу ( Дополнительный рисунок 2 ) . Для дизайна STAR удлиненная лаг-фаза совпадала с постоянно более длительным дополнительным временем ~ 100 мин для достижения насыщения культуры.
Чтобы лучше понять, является ли расширенная фаза задержки MLC на основе STAR общей особенностью, которую следует ожидать при использовании этого типа регулятора, мы перестроили эту конструкцию, используя другую STAR (STAR 2 ), которая имела идентичные начальные 72 последовательность пар оснований, но уникальная последовательность 10 пар оснований на ее 3′-конце ( Дополнительная таблица 2 ).Как и следовало ожидать от такой похожей конструкции, тестирование конструкции STAR 2 показало производительность, аналогичную исходной конструкции STAR, с хорошим динамическим диапазоном и аналогичным выражением утечки на выходе ( Таблица 1 ; Дополнительный Рисунок 3 ; Методы ). Однако, в отличие от оригинала, конструкция STAR 2 показала фазу задержки (161 мин) и время удвоения (72 мин), которые близко соответствовали другим MLC. Это говорит о том, что длительное время задержки, наблюдаемое для первоначального дизайна STAR, вероятно, было связано с некоторыми высокоспецифичными и не охарактеризованными нецелевыми взаимодействиями с эндогенными клеточными процессами, а не с общей особенностью регуляторного механизма STAR.
Цифровые переходы и подавление слабых входных сигналов
Наше предыдущее моделирование MLC показало, что помимо улучшенных характеристик в состояниях «включено» и «выключено» добавление регулятора L2 также изменило функцию отклика , вызывая более резкий переход из состояния «выключено» в состояние «включено» из-за более низкого базового выражения и способности подавлять шум низкого уровня на входе (, рис. 1D, E ).
Чтобы оценить, присутствовали ли эти особенности, мы сгенерировали функции отклика контроллеров, выращивая клетки при различных концентрациях входного индуктора и измеряя стабильную выходную флуоресценцию GFP.Резкость перехода фиксируется совместимостью функции Хилла с этими данными. Мы обнаружили, что по сравнению с P tac SLC, как THS, так и STAR MLC увеличили это значение более чем вдвое с 3,4 до более чем 7, в то время как конструкция DC сохранила идентичное значение (, таблица 1 ). . Высокая кооперативность соответствует очень резкому ступенчатому переходу между состояниями «включено» и «выключено», что ясно видно из кривых функции отклика (, рис. 4A, ).Высокая нелинейность функций отклика MLC THS и STAR потенциально полезна для задач обработки информации. В частности, реализация цифровой логики внутри ячеек требует четких состояний «включено» и «выключено» и ограниченного шанса для сигналов находиться в промежуточных состояниях. Резкие переходы в функции отклика гарантируют, что будет меньше места для входа в промежуточную точку во время перехода, гарантируя, что всегда будет задано состояние «включено» или «выключено». Кроме того, высокая нелинейность также может быть использована для создания бимодальности.Например, если зашумленный вход расположен так, чтобы охватить точку перехода в функции отклика, популяция ячеек будет иметь большие группы ячеек в состояниях «включено» и «выключено», а в промежуточных состояниях будет гораздо меньше из-за резкого перехода. и малая вероятность падения в этом небольшом регионе.
Рисунок 4: Функции отклика одно- и многоуровневых контроллеров in vivo .( A ) Функции отклика в устойчивом состоянии контроллеров, показывающие выходную флуоресценцию GFP (с поправкой на аутофлуоресценцию клеток) для различных входных концентраций IPTG (0, 0.002, 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мМ). Точки показывают три биологические копии для каждого контроллера и состояния (черные кружки, P tac ; синие квадраты, THS; красные ромбы, STAR; оранжевые кресты, DC). Серая заштрихованная область показывает стандартное отклонение аутофлуоресценции клеточного GFP от 11 биологических повторов. ( B ) Сравнение того, как нормализованный выход GFP (как часть максимальной флуоресценции GFP) изменяется в ответ на изменения в нормализованной транскрипционной активности P tac (как часть его максимальной активности).Многоуровневая регуляция может привести к подавлению или усилению скорости продукции GFP на выходе по сравнению с прямой регуляцией транскрипции (т.е. линия конкретного многоуровневого контроллера опускается ниже или выше диагонали, соответственно). Вставка показывает увеличенную область, а заштрихованная серым область обозначает выходной уровень GFP 1% для контроллера.
Чтобы количественно оценить способность каждого MLC подавлять входной шум низкого уровня, мы дополнительно проанализировали функции отклика. Как упоминалось ранее, большие различия в динамическом диапазоне затрудняют сравнение проектов.Учитывая, что промотор, управляющий транскрипцией для каждого MLC, идентичен (P tac ), расхождения возникают из-за различных скоростей трансляции gfp , контролируемых соответствующими сайтами связывания рибосом. Они действительно различаются по последовательности и силе для каждого дизайна, а в некоторых случаях являются специфическими и неотъемлемой частью функции регулятора РНК. Поэтому, чтобы обеспечить возможность сравнения, мы нормализовали выходной сигнал каждого MLC до его максимального выхода и использовали данные из P tac SLC для оценки входной активности промотора P tac , используемого в каждом контроллере.Если бы вторичное регулирование отсутствовало (как в SLC), то можно было бы ожидать, что нормализованные входной и выходной сигнал будут следовать прямой линии, где один равен другому (см. Проект P tac на рисунке , рис. 4B ). Однако, если вторичное регулирование подавляет активность входа P tac , тогда будет виден более низкий нормализованный выход для входа, и, наоборот, усиление входа приведет к более высокому нормализованному выходу для входа.
Используя этот подход, мы оценили ответы каждого MLC и обнаружили, что все они вызывали подавление низких уровней входной активности промотора и усиление более высоких входных активностей.Этот эффект был наиболее заметным для конструкций THS и STAR, причем оба они могли гарантировать, что выходной сигнал контроллера поддерживается ниже 1%, даже когда входной промотор достигает активности 3,5% ( Рис. 4B , вставка). Эти результаты подтверждают выводы нашего моделирования и демонстрируют возможность использования MLC для фильтрации нежелательной входной активности в шумной среде.
Производительность контроллера в системе бесклеточной экспрессии
Растет интерес к использованию систем бесклеточного синтеза белка (CFPS) 41 в качестве средства прототипирования синтетических генетических схем 42 , позволяющих быстро характеризовать генетических частей и метаболических путей 43 , а в последнее время в качестве новой платформы биопродукции 44 .Несмотря на то, что был достигнут большой прогресс в расширении применения систем CFPS 45–48 , стратегии строгого контроля экспрессии белков еще не разработаны.
Чтобы оценить производительность наших контроллеров в бесклеточном контексте, мы использовали систему CFPS, созданную из неочищенного лизата клеток E. coli , и выполнили простые периодические реакции ( Методы ), которые мы постоянно отслеживали, так что выходная скорость экспрессии можно сделать вывод по изменениям флуоресценции GFP с течением времени.Эти эксперименты показали, что все контроллеры также функционируют в системе CFPS и ведут себя качественно, аналогично ситуации in vivo ( Рисунок 5A ; Дополнительная таблица 3 ). В целом, дизайн MLC работал лучше, чем дизайн SLC, показывая более низкий процент базальной экспрессии, больший динамический диапазон и кратные изменения между состояниями «выключено» и «включено» с более резкими, более цифровыми переходами (т.е. работоспособность в функции Хилла подходит).
Рисунок 5: Производительность одно- и многоуровневых контроллеров в бесклеточной системе экспрессии.( A ) Функции отклика контроллеров, показывающие выходную скорость продукции GFP в произвольных единицах флуоресценции в час (au / hr) через 4 часа после начала бесклеточной реакции для различных входных концентраций IPTG (0, 0,002, 0,01 0,05, 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мМ). Точки показывают три биологические копии для каждого контроллера и состояния (черные кружки, P tac ; синие квадраты, THS; красные ромбы, STAR; оранжевые кресты, DC) ( B ) Выходная скорость производства GFP контроллеров выше время с момента начала реакции.Временные курсы показаны для контроллеров в состоянии «выключено» (0 мМ IPTG; слева) и «включено» (10 мМ IPTG; справа). Производительность GFP в каждый момент времени рассчитывается как средняя производительность GFP за предыдущие 1,5 часа ( Методы ).
Однако, по сравнению с ситуацией in vivo , мы наблюдали явные различия в производительности. Наибольшее падение производительности наблюдалось для дизайна SLC P tac , для которого базальная экспрессия достигла 10% от максимального выхода и только 10-кратный динамический диапазон (т.е.е. между состояниями выхода «выключено» и «включено»). Потери производительности наблюдались и для других конструкций MLC; однако дизайн THS показал <1% базальной экспрессии и ~ 350-кратное изменение между выходными состояниями «выключено» и «включено». Эти потери производительности, вероятно, были вызваны относительно низкими эффективными концентрациями регуляторов, которые могут быть достигнуты в системе CFPS по сравнению с сильно переполненной цитоплазмой живой клетки 49 . Особенно низкие концентрации репрессора LacI, вероятно, будут ограничивать максимальную репрессию, которая может быть достигнута в системе CFPS, учитывая более высокую базальную экспрессию, наблюдаемую при наблюдаемой производительности.
Примечательно, что STAR MLC продемонстрировал аналогичную производительность в отношении процента базовой экспрессии, кратности изменения и кооперативности по сравнению с настройкой in vivo ( таблица 1 и дополнительная таблица S3 ). Эта надежность может быть связана с тем фактом, что конструкция STAR использует вторичный контроль на уровне транскрипции, в частности, посредством преждевременного прекращения транскрипции в 5 ‘UTR выходного гена, и, следовательно, регулирование ограничивает потенциально активные транскрипты, которые присутствуют в реакции. ( Рисунок 2E ).Напротив, дизайн THS производит полноразмерные транскрипты и основан на постоянном подавлении инициации трансляции вторичными структурами РНК (, фиг. 2D, ). Наши данные показывают, что регулятор STAR меньше подвержен влиянию различных условий системы CFPS, чем THS, что позволяет конструкции STAR поддерживать практически идентичные характеристики в этих условиях.
Измерения динамики этих экспериментов также позволили нам количественно оценить выходную производительность GFP по мере протекания реакции.Эти данные выявили ключевое различие между in vivo и системой CFPS, которое наблюдалось для всех конструкций контроллеров. В течение первых 2 часов уровень экспрессии для состояний «выключено» и «включено» для каждого дизайна был практически идентичным, причем регулирование наблюдалось только после этого момента и сильно влияло на скорость продукции GFP на выходе через 4 часа ( Рисунок 5B ). Начальная постоянная выходная скорость продукции GFP в системе CFPS соответствовала порядку различной силы RBS, измеренной in vivo .Более быстрое снижение экспрессии, наблюдаемое для конструкций MLC по сравнению с SLC для регулируемого «выключенного» состояния, ожидается из-за дополнительного регуляторного уровня (регулятор L2 ) этих конструкций. Наблюдаемая «запаздывающая» фаза регуляции, скорее всего, отражает время, необходимое каждому контроллеру для экспрессии достаточного количества LacI для взаимодействия с промоторами P tac , которые действуют как входные данные во всех наших разработках. В отличие от системы CFPS, в экспериментах in vivo клетки достигли экспоненциального роста, и системы находились в устойчивом состоянии, равном разложению LacI, и скорости разведения, равные скорости продуцирования, чтобы поддерживать постоянную концентрацию репрессора.Следовательно, хотя многоуровневая регуляция предлагает значительно улучшенный контроль над экспрессией генов в системах CFPS, для периодических реакций крайне важно, чтобы необходимые регуляторные компоненты (например, репрессорные белки) присутствовали в достаточных концентрациях с самого начала эксперимента для обеспечения строгой регуляции. Это может быть достигнуто путем создания системы CFPS из клеток, которые уже экспрессируют регуляторы в высоких концентрациях, путем отдельного добавления этих компонентов в реакционную смесь перед началом эксперимента или путем использования микрореакторов, позволяющих системе CFPS поддерживать концентрации в стабильном состоянии. регуляторов путем постоянного разбавления продуктов реакции 50 .
Обсуждение
В этой работе мы показали, как многоуровневый контроль экспрессии генов предлагает средства для более строгого регулирования экспрессии генов как in vivo, , так и in vitro . Используя многоступенчатый процесс транскрипции и трансляции, лежащий в основе центральной догмы биологии, и одновременно регулируя оба процесса в ответ на входной сигнал, мы демонстрируем моделирование ( Рисунок 1, ) и эксперименты ( Рисунки 3 — 5 ), как могут быть созданы индуцибельные системы экспрессии со значительно сниженной утечкой экспрессии в состоянии «выключено», при этом сохраняя при этом высокие скорости экспрессии после индуцирования.Кроме того, мы показали, что многоуровневое регулирование создает более цифровой переключатель при переходе между состояниями «выключено» и «включено» и подавляет низкоуровневый транскрипционный шум (, рис. 4, ), оба из которых являются ценными свойствами при разработке. генетические системы для обработки информации или когда высокотоксичные продукты или возбудимые системы выступают в качестве последующих продуктов.
Наша лучшая конструкция MLC, в которой используется THS для регулирования L2 , достигла> 2000-кратного изменения выходной мощности при индукции in vivo и показала SNR 10 дБ (, таблица 1 ), что делает его одним из наиболее жестко контролируемые и высокопроизводительные индукционные системы, созданные на сегодняшний день.Кроме того, гибкость нашего модульного генетического инструментария для сборки новых многоуровневых контроллеров (, рис. 2, ) и доступность многих других THS позволяет легко разрабатывать дополнительные ортогональные MLC, которые можно использовать параллельно в одной и той же ячейке. Стоит отметить, что базовый промотор P tac , который использует THS MLC, достиг только 93-кратного изменения и 0,2 дБ SNR при использовании отдельно в качестве SLC. Следовательно, использование многоуровневого регуляторного подхода, описанного в этой работе, может предложить средства для значительного улучшения производительности многих существующих низкоэффективных датчиков транскрипции без какой-либо необходимости модифицировать факторы транскрипции или промоторные последовательности, составляющие эти устройства.
С улучшениями, которые мы наблюдаем при использовании многоуровневой регуляции, вероятно не случайно, что малые интерферирующие РНК (siRNAs) также широко используются бактериями для улучшения регуляции многих эндогенных процессов 51–53 . РНК идеально подходят для этой задачи, создавая небольшую метаболическую нагрузку и предлагая быстрый ответ. В этой работе мы выбрали синтетические регуляторы на основе РНК, которые функционируют только посредством гибридизации РНК-РНК. Хотя это снижает нашу зависимость от других клеточных механизмов и облегчает их перенос между штаммами / организмами, известно, что многие эндогенные регуляторы siRNA используют белковые шапероны, такие как Hfq, для увеличения их аффинности связывания с мишенями и усиления их регулирующего эффекта 54 .Было бы интересно изучить использование синтетических регуляторов, которые используют эти шапероны 38 , или использовать последние достижения в дизайне частей РНК 16 , чтобы увидеть, возможны ли дальнейшие улучшения в производительности.
Строгое регулирование наших контроллеров достигается за счет включения регуляторного мотива C1-FFL, который, как известно, эволюционно выбран во многих природных и инженерных системах 55 и может использоваться для реализации многих полезных функций 22 .Более поздняя работа также продемонстрировала важность взаимосвязей и кластеризации многих мотивов в координации более сложного поведения 56,57 . Хотя эта работа была сосредоточена на демонстрации того, что регуляция транскрипции и трансляции может аккуратно вписываться в структуру C1-FFL, интересным будущим направлением будет изучение того, как эти структуры более высокого уровня (например, кластеры мотивов или сетевые структуры более высокого уровня) могут быть реализованы с использованием подходы, изложенные в этой работе, призваны способствовать параллельной координации множества взаимосвязанных процессов.
Это исследование началось с целью более жесткого контроля экспрессии генов. Однако при разработке наших MLC стало очевидно, что разработанные нами более сложные нормативные проекты имеют много других преимуществ. Синтетическая биология до настоящего времени часто фокусировалась на упрощении сложности и сокращении систем до их минимальных частей. Наши результаты показывают, что дополнительные исследования, изучающие сложность синтетических регуляторных систем, могут также принести плоды, позволяя нам более эффективно использовать возможности биологии, объединяя множество различных процессов и частей в унисон.Представленный здесь набор генетических инструментов предлагает отправную точку для таких исследований, посвященных фундаментальным процессам транскрипции и трансляции.
Методы
Штаммы, среды и химические вещества
Все клонирование и характеризация генетических конструкций проводились с использованием штамма Escherichia coli , штамма Dh20-β (Δ (ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15e14-ΔZA1 rpsL (StrR) rph spoT1 Δ (mrr-hsdRMS-mcrBC) (New England Biolabs, C3019I).Клетки выращивали в среде для роста Dh20-β (New England Biolabs, B9035S) для трансформации, бульоне LB (Sigma-Aldrich, L3522) для общего размножения и минимальной среде M9 с добавлением глюкозы (6,78 г / л Na 2 HPO 4 , 3 г / л KH 2 PO 4 , 1 г / л NH 4 Cl, 0,5 г / л NaCl (Sigma-Aldrich, M6030), 0,34 г / л гидрохлорида тиамина (Sigma T4625), 0,4% D-глюкозы (Sigma-Aldrich, G7528), 0,2% казаминокислот (Acros, AC61204-5000), 2 мМ MgSO 4 (Acros, 213115000) и 0.1 мМ CaCl 2 (Sigma-Aldrich, C8106)) для экспериментов по характеризации. Выбор антибиотика осуществлялся с использованием ампициллина 100 мкг / мл (Sigma-Aldrich, A9518) и 50 мкг / мл канамицина (Sigma-Aldrich, K1637). Индукцию систем экспрессии проводили с использованием различных концентраций изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG) (Sigma-Aldrich, I6758).
Сборка контроллеров
Все частичные плазмиды были либо синтезированы напрямую (GeneArt, Thermo Fisher Scientific), либо собраны в виде комплементарных одноцепочечных олигонуклеотидов ДНК, отожженных вместе.Контроллеры, состоящие из 8 частей (pA – pH) плюс основной цепи (pMLC-BB1), были собраны с использованием стандартного метода клонирования Golden Gate ( Рисунок 2B ) 27 . Вкратце, для каждой сборки мы начали с 18,5 нг необходимых частей плазмид (pA – pH) и 18,5 нг основной цепи (pMLC-BB1), которые нужно было добавить в 5 мкл реакции Golden Gate. Использовали стандартные условия реакции производителя, но в четверти их нормального объема (New England Biolabs, E1601). Затем 2 мкл этой реакционной смеси использовали для трансформации 12.5 мкл химически компетентных клеток Dh20-β (New England Biolabs, C3019) для дальнейших экспериментов. Все собранные конструкции были проверены секвенированием по Сэнгеру (Eurofins Genomics). Аннотированные последовательности всех частей и остова плазмид и собранных контроллеров представлены в формате GenBank в Supplementary Data 2 . Карты плазмид показаны на дополнительных рисунках 4 и 5 .
Эксперименты по характеризации
Отдельные колонии клеток, трансформированных соответствующей генетической конструкцией, инокулировали в 200 мкл среды M9 с добавлением глюкозы и канамицина для отбора в 96-луночном микротитровальном планшете (Thermo Fisher Scientific, 249952).Культуры выращивали в течение 14 часов в инкубаторе со встряхиванием (Stuart, S1505) при 37 ° C и 1250 об / мин. После этого культуры разбавляли 3:40 (15 мкл в 185 мкл) в среде M9 с добавлением глюкозы, канамицина для селекции и IPTG для индукции в новом 96-луночном микротитровальном планшете и выращивали в течение еще 4 часов в тех же условиях. . Наконец, культуры дополнительно разбавляли 1:10 (10 мкл на 90 мкл) в фосфатно-солевом буфере (PBS) (Gibco, 18912-014), содержащем 2 мг / мл канамицина, для остановки трансляции белка.Эти образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа, чтобы обеспечить полное созревание GFP перед проведением проточной цитометрии.
Проточная цитометрия
Измерения флуоресценции GFP в отдельных клетках проводили с использованием проточного цитометра Acea Biosciences NovoCyte 3000, оснащенного NovoSampler, чтобы обеспечить автоматический сбор образцов с 96-луночного микротитровального планшета. Сбор данных производился с помощью программы NovoExpress. Клетки возбуждали с помощью лазера 488 нм и измерения флуоресценции GFP проводили с помощью детектора 530 нм.По крайней мере, 10 6 событий было зарегистрировано для каждой выборки. Кроме того, чтобы обеспечить преобразование флуоресценции GFP в калиброванные единицы MEFL 58 , одна лунка на планшет содержала 15 мкл 8-пиковых калибровочных частиц Rainbow (Spherotech, RCP-30-5A), разведенных в 200 мкл PBS. Автоматическое стробирование событий и преобразование флуоресценции GFP в единицы MEFL было выполнено с использованием каналов прямого (FSC) и бокового рассеяния (SSC) и пакета FlowCal Python версии 1.2.2 с параметрами по умолчанию 58 .Для коррекции аутофлуоресценции клеток GFP клетки E. coli Dh20-β, не содержащие генетической конструкции, выращивали в идентичных условиях. Среднее значение флуоресценции GFP в единицах MEFL из трех биологических повторов этих клеток затем вычиталось из измерений флуоресценции клеток, содержащих наши генетические конструкции, для корректировки аутофлуоресценции клеток.
Планшетный ридер: измерения производительности конструкции in vivo
Отдельные колонии клеток, трансформированных соответствующей генетической конструкцией, инокулировали в 200 мкл среды M9 с добавлением глюкозы и канамицина для отбора в 96-луночном микротитровальном планшете (Thermo Fisher Scientific, 249952) .Культуры выращивали в течение 4 часов в инкубаторе со встряхиванием (Stuart, S1505) при 37 ° C и 1250 об / мин. После этого культуры разбавляли 3:40 (15 мкл в 185 мкл) в среде M9 с добавлением глюкозы, канамицина для селекции и IPTG для индукции в 96-луночном микропланшете с прозрачным основанием 190 мкм (4titude, Vision Plate TM ). , 4ти-0223). Этот спектрофотометрический анализ проводили с использованием планшет-ридера BioTek Synergy Neo2 при 37 ° C. Оптическую плотность при 600 нм (OD 600 ) измеряли каждые 10 минут в течение 16-часового периода.Измерения OD 600 также были взяты из образцов среды M9 с добавлением глюкозы, не содержащей клеток, чтобы дать возможность количественной оценки автофлуоресценции среды. Встряхивание производилось автоматически на протяжении всего эксперимента. Сбор данных производился с использованием программного обеспечения Gen5 версии 3.04. Для каждой временной точки автофлуоресценцию среды вычитали из измерения образца.
Внеклеточная экспрессия
Лизат клеток E. coli для CFPS был приготовлен с использованием протокола автолиза 59 .В этом протоколе клетки E. coli BL21-Gold (DE3), несущие плазмиду pAS-LyseR, дают лизат клеток высокого качества путем замораживания-оттаивания. В частности, эти клетки выращивали в течение ночи при 37 ° C в бульоне LB с добавлением ампициллина. На следующий день клетки субкультивировали в 2 л среды 2X YTPG с добавлением ампициллина и выращивали при 37 ° C до OD 600 1,5. Затем клетки собирали при 2000 г в течение 15 минут при комнатной температуре в четыре центрифужные флаконы и 45 мл холодного буфера S30A (50 мМ трис-HCl при pH 7.7, 60 мМ глутамата калия, 14 мМ глутамата магния, конечный pH 7,7) добавляли к каждому. Затем клетки ресуспендировали путем интенсивного перемешивания на вортексе, выливали в предварительно взвешенную пробирку Falcon объемом 50 мл и центрифугировали, как на предыдущем этапе. Супернатанты полностью удаляли, и пробирки сокола снова взвешивали. Был рассчитан чистый вес каждого осадка, и относительно его веса были добавлены два объема холодного S30A с 2 мМ DTT (3 мл на 1,5 г гранулы). После интенсивного вихревого перемешивания образцы хранили при –80 ° C.На следующий день замороженные клетки помещали на водяную баню комнатной температуры для оттаивания, интенсивно перемешивали на вортексе, инкубировали при 37 ° C на шейкере в течение 45 минут, снова перемешивали на вортексе и затем инкубировали при 37 ° C в течение 45 минут. Затем образцы центрифугировали при 30000 g в течение 60 мин при 4 ° C. Супернатанты осторожно отбирали пипеткой и помещали в пробирки объемом 1,5 мкл, а затем, наконец, центрифугировали при 20000 g с использованием настольной центрифуги в течение 5 минут для удаления остаточного клеточного дебриса. Аликвоты лизата хранили при –80 после мгновенного замораживания в жидком азоте.
Для приготовленного лизата, Mg-глутамат и K-глутамат титровали со всеми компонентами бесклеточной реакции на основе протокола Sun et al. 60 , что приводит к концентрациям 10 нМ и 60 мМ, соответственно, для оптимальной продукции GFP. Каждую реакцию готовили в конечном объеме 10,5 мкл, содержащем 33% лизата, Mg-глутамат и K-глутамат при титровании, и смесь аминокислот, энергетическую смесь и PEG 8000. Для бесклеточных экспериментов с конструкциями SLC и MLC, maxi-prepped плазмиды (с использованием набора Machery-Nagel NucleoBond Xtra Maxi) были добавлены в конечной концентрации 10 нМ вместе с различными концентрациями IPTG (0,0.002, 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мМ). При осторожном перемешивании пипеткой 10 мкл реакционной смеси переносили в 384-луночный планшет (Greiner Bio-One, 784076) и контролировали флуоресценцию GFP (длины волн возбуждения / испускания 485/528 нМ и усиление = 100) каждые 10 мин в планшет-ридер (Tecan Infinite 200 PRO).
Отношение сигнал / шум
Отношение сигнал / шум (SNR) в децибелах (дБ) было рассчитано на основе распределений флуоресценции GFP проточной цитометрии с использованием уравнения 23
Здесь μ ON и μ OFF — средние геометрические распределения для состояний «включено» и «выключено» соответственно, а σ — геометрическое стандартное отклонение распределения для состояние «выключено».Состояния «выключено» и «включено» соответствуют клеткам, выращенным в 0 и 1 мМ IPTG, соответственно.
Анализ данных и численное моделирование
Анализ данных был выполнен с использованием Python версии 3.7.4 и NumPy версии 1.17.4, SciPy версии 1.3.1, Pandas версии 1.0.3, FlowCal версии 1.2.2 и Matplotlib версии 3.1. 1 библиотеки. Модели ODE были смоделированы с использованием функции odeint пакета Python версии 1.1 SciPy.integrate с параметрами по умолчанию. Функции стабильного отклика контроллеров были рассчитаны путем подбора средних значений флуоресценции GFP из распределений проточной цитометрии для диапазона входных концентраций IPTG к следующей функции Хилла
Здесь y — выходная флуоресценция GFP в единицах MEFL, y min и y max — минимальная и максимальная выходная флуоресценция GFP в единицах MEFL, соответственно, K — входной IPTG концентрации, при которой выход является половинным от максимума, n — коэффициент Хилла, а x — входная концентрация IPTG.Подбор экспериментальных данных был выполнен с использованием нелинейного метода наименьших квадратов и функции curve_fit из пакета SciPy.integrate версии 1.1. Генетические диаграммы были созданы с использованием DNAplotlib версии 1.0 61,62 , а рисунки — с использованием Omnigraffle версии 7.15 и Affinity Designer версии 1.8.3.
Открытое письмо от клиента вашей мечты
Эй, это я. Клиент вашей мечты. Нам нужно поговорить.
Вы меня еще не знаете. Может ты думаешь, что я единорог.Или сверчок.
Вымышленный персонаж, которого вы придумали в своей голове. «Образ идеального клиента», который вы составили во время семинара по интернет-маркетингу.
Но я не такой. Я обещаю.
Я живой и дышащий человек. У меня есть сердце, у меня есть душа. И головные боли, и зубные боли, и плохие времена тоже, как и ты.
(И отсылки к старым фильмам. Ничего не могу поделать.)
В любом случае. У меня тоже проблема. Для кого-то это может не быть большой проблемой .Но для меня он достаточно большой. Вот почему я трачу так много времени на поиски решения.
Должен сказать, это непросто. Многие люди в сети, кажется, находят для меня решение. Но я им не доверяю. Я имею в виду, я хочу им доверять. Я действительно, правда делаю. Но они не облегчают мне задачу.
Я слежу за ними в социальных сетях. И они показывают мне логотип вместо своего лица. Они присылают мне автоматические сообщения. Спасибо за подписку, загрузите мою бесплатную электронную книгу.
Я смотрю их сайты в поисках следов человечности. Но я получаю стоковые фотографии счастливых деловых людей. Всплывающие окна, которые нельзя закрыть. Всплывающие окна на всплывающих окнах на всплывающих окнах.
Иногда я даже даю им свое имя и адрес электронной почты. Чтобы лучше их узнать. Может быть, за экраном все-таки — это человек.
И они показывают мне обратный отсчет. Это удивительное предложение исчезнет через 1 час 33 минуты. Навсегда. Вы должны купить сейчас.Это разовое предложение.
А потом они присылают мне электронные письма. Они повторяют мое имя, как побитую пластинку Это жутковато. Почему не купила, Вероника? Я так удивлен, Вероника. Думал, ты серьезно к этому относишься, Вероника. Я тоже могу использовать тег FNAME. Это не так уж и сложно.
☆☆☆
Не хочу жаловаться. Я просто устал искать ВАС и постоянно сталкиваться со всем маркетинговым шумом. Я не возражаю против того, чтобы пройти A / B-тестирование, направить и преобразовать, пока я все еще могу чувствовать себя человеком.
☆☆☆
Итак, я хотел у вас кое-что спросить: пожалуйста, перестаньте прятаться от меня. Ты мне нужен.
Я знаю, что вы существуете. Я знаю, что ты можешь мне помочь.
Меня не волнуют ваши опечатки, акцент, плохие волосы или что-то еще, что мешает вам выставить себя напоказ.
Меня не волнуют ваши плагины, почтовые службы и стратегии в социальных сетях. Пожалуйста, перестань «готовиться» и начни со мной разговаривать. Я ищу тебя каждый день.
Интернет-мир очень шумный, поэтому может пройти некоторое время, прежде чем мы найдем друг друга. Но, пожалуйста, не сдавайся. Я могу быть сразу за следующим углом.
☆☆☆
И когда я найду тебя, пожалуйста, дай мне немного времени, чтобы познакомиться с тобой. Это не ты, это я. Меня слишком много раз обманывали. Я не куплю у вас сразу.
Я даже не свяжусь с сразу. Я не назначаю бесплатные звонки незнакомым людям. Пожалуйста, не принимайте это на свой счет.Пожалуйста, дайте мне другой, менее устрашающий вариант, чтобы я мог лучше узнать вас.
А также, , пожалуйста, , разрешите мне сказать «нет», не чувствуя себя виноватым. У меня может быть сотня причин, по которым я не купил у вас на этот раз . Причины обычно не имеют ничего общего с вашим предложением. У меня есть жизнь, помнишь?
И, наконец, пожалуйста, не отказывайтесь от меня только потому, что вы меня не видите и не слышите.